streptavidin-70
刘耀文的大沙雕
钟意阿满
蛋白纯化填料有哪几种？其应用特点是什么？
为啥egfp报告基因能检测转基因是否成功。
做小鼠胚胎发育的研究人员一般喜欢用LacZ,也就是将LacZ置于一个启动子的调节之下.用LacZ可以进行胚胎全身染色(whole body staining),这样可以了解一个基因在体内的表达谱全貌.如果做细胞跟踪,比如免疫细胞,神经细胞等,一般喜欢用荧光蛋白.这样一是容易对细胞进行分离(比如FACS)和体外分析,二是容易对分离的细胞进行体内追踪(比如Adoptive transfer).早些年用的最多的是EGFP和EYFP.有的时候,我们需要将两种不同的reporter小鼠交配在一起,研究两个基因的关系,这时可以将两个基因采用不同的荧光蛋白进行标记,也就是做两种不同的模式小鼠.因为早期大家多是用EGFP,现在可以多做一些其它荧光蛋白的报告基因小鼠,以便跟以前研发的EGFP小鼠结合起来研究.zsGreen和EGFP,EYFP都是绿色荧光.EGFP和EYFP很难区分开.zsGreen是一个比较稳定的绿色荧光蛋白.DsRed和TdTomato都是红色荧光.这两种荧光蛋白都有报告基因模式小鼠发表.TdTomato是一个信号非常强的荧光蛋白,目前已经有报告基因小鼠发表,对细胞/小鼠也没有明显的毒性.相信以后会有越来越多的小鼠用TdTomato来做报告基因.虽然mRFP和mCherry是两个非常好的荧光蛋白,但由于它们需要584nm的激发光,所以一般的FACS仪器不能检测到信号,需要用到LSRII这样的仪器,而很多实验室可能没有这样的仪器.也有用EBFP,ECFP做细胞实验的,但用到小鼠上的比较少.比如需要用到紫外光来激发.如果想在一个小鼠里表达两种荧光蛋白,最好是用两种分得比较开的,比如,最好不要同时用EGFP和EYFP.\x0dHuCD2和Thy1.1是细胞表面受体.HuCD2因为去掉了C-term序列,使得其失去了信号传导的功能.那什么时候会用这两种分子呢?比如我们想研究一个细胞内蛋白基因(比如转录因子)的功能,经常需要把表达这个蛋白的细胞分离纯化出来.这个时候可以将HuCD2或Thy1.1报告基因放置在这个细胞内蛋白基因启动子下(比如加一个IRES-Thy1.1),这样所有表达这个细胞内蛋白的细胞都会在细胞表面表达Thy1.1.这样就可以用anti-Thy1.1抗体将这一群细胞分离出来,进行后续研究.当然也可以用anti-Thy1.1抗体进行组织切片的免疫荧光检测.\x0dHA、FLAG、Biotin等是细胞和生化实验中常用的标签多肽或蛋白.在Western blot,免疫沉淀(Immunoprecipitation)等实验中经常用到,因为有非常特异的HA、Flag抗体.Biotin可以跟生物素(Streptavidin)直接结合并用于免疫沉淀.在模式小鼠中,这些标签多肽或蛋白可以与要研究的蛋白做成融合蛋白.这种模式小鼠最常被用到的是Chip-chip实验.比如要研究一个转录因子的功能,就需要知道这个转录因子在细胞内(正常或刺激条件下)结合到染色体基因组DNA的位置以及结合序列.我们知道,特异性好、亲和力高的抗转录因子的抗体非常不容易得到或制备.这个时候可以将标签多肽(比如FLAG)放在转录因子的C-term,做成融合蛋白.刺激细胞之后,对细胞进行化学交联,并破碎细胞以及基因组DNA,然后用anti-FLAG抗体作免疫沉淀,将转录因子沉淀下来.最后分析这些转录因子所结合的DNA片段序列,从而找到该转录因子的在基因组上的识别序列,也就找到了该转录因子的作用基因.\x0d荧光素酶做报告基因模式小鼠,一般是为了做活体成像实验.比如在一个细胞因子启动子下面放置荧光素酶基因.免疫小鼠之后,有些细胞或器官表达该细胞因子同时表达荧光素酶.通过注射荧光素酶底物可以检测荧光在小鼠体内的分布,从而得出该细胞因子在不同免疫条件下的表达情况.荧光素酶在癌症研究中也经常用.通过荧光活体成像可以研究肿瘤细胞的发生和转移.\x0d报告基因很多.这里只是一点简要的介绍.不同的模式小鼠根据实验目的不同,可以做非常不同的设计.。
抱起亚轩找小葵
如何应用 ELISA 检测 IL-2 IL-6
PurKine His-Tag Ni-IDA Resin PurKine 组氨酸标签 Ni【镍】-IDA树脂 Abbkine BMR20000 。
PurKine His-Tag Cu-IDA Resin PurKine 组氨酸标签 Cu【铜】-IDA树脂 Abbkine BMR20040 。
PurKine GST-Tag Glutathione Resin PurKine 谷胱甘肽S转移酶标签 谷胱甘肽树脂 Abbkine BMR20100 。
PurKine MBP-Tag Dextrin Resin 6FF PurKine 麦芽糖结合蛋白标签 糊精树脂（6%交联） Abbkine BMR20206 。
PurKine Biotin-Tag Streptavidin Resin 6FF PurKine 生物素标签 链霉亲和素树脂（6%交联） Abbkine BMR20306 。
PurKine Biotin-Tag Streptavidin Packed Column 6FF PurKine 生物素标签 链霉亲和素预装柱（6%交联） Abbkine BMC20306 。
PurKine Strep II-Tag Strep-Tactin Resin 4FF PurKine Strep II标签 Strep-Tactin树脂（4%交联） Abbkine BMR20400 。
PurKine Protein A Resin PurKine 蛋白A树脂 Abbkine BMR20500 。
PurKine Protein G Resin PurKine 蛋白G树脂 Abbkine BMR20600 。
PurKine Protein A/G Resin 4FF PurKine 蛋白A/G树脂（4%交联） Abbkine BMR20704 。
PurKine Protein L Resin PurKine 蛋白L树脂 Abbkine BMR20800 。
PurKine Protein AT Resin 4FF PurKine 蛋白AT树脂（4%交联） Abbkine BMR20904 。
PurKine Antibody Purification SulfoLink Resin PurKine 抗体纯化SulfoLink树脂 Abbkine BMR21000 。
PurKine Antibody Purification NHS-Activated Resin 4FF PurKine 抗体纯化NHS-激活树脂（4%交联） Abbkine BMR21100 。
PurKine Heparin Resin 6FF PurKine 肝素树脂（6%交联） Abbkine BMR21206 。
PurKine Benzamidine Resin 4FF PurKine 苯甲脒树脂（4%交联） Abbkine BMR21306 。
PurKine Endotoxin Removal Resin PurKine 内毒素清除树脂 Abbkine BMR21400 。
大圣杰锅是
avdin和Streptavidin有什么区别
给你提供一份进口的ELISA定量检测人血清中IL-6的说明书：
人IL-6 ELISA
原理：
本试剂盒采用双抗夹心ELISA法。抗人IL-6单抗包被于酶标板上，人标本中的IL-6会与单抗结合。加入生物素化的抗人IL-6（二抗），它将与结合在单抗上的人IL-6结合而形成免疫复合物，未结合的将被洗去。辣根过氧化物酶标记的Streptavidin 将与二抗的生物素结合，多余的物质会被洗掉。加入TMB显色。人IL-6的浓度与OD(450nm)成正比。
试剂盒组成：
酶标板(Coated Wells) 48wells Anti-human IL-6 Biotin 1 vial。
浓缩洗涤液(100X)(Washing Concentrate) 5ml 标准品(Standards) 1 vial。
显色液(TMB Substrate) 6ml 标准品稀释液(Standard Diluent) 7ml。
终止液(Stop Solution) 6ml 浓缩酶联物（HRP） 1 vial。
酶联物稀释液(HRP Diluent) 7ml 生物素稀释液(Biotin Diluent) 7ml。
注意事项:
1. 严格按照规定的时间和温度进行温育以保证准确结果。所有试剂都必须在使用前达到室温20-25℃。使用后立即冷藏保存试剂。
2. 洗板不正确可以导致不准确的结果。在加入HRP或底物前确保尽量吸干孔内液体。温育过程中不要让微孔干燥掉。
3. 消除板底残留的液体和手指印，否则影响OD值。
4. 底物显色液应呈无色或很浅的颜色，已经变蓝的底物液不能使用。
5. 避免试剂和标本的交叉污染以免造成错误结果。
6. 在储存和温育时避免强光直接照射。
7. 平衡至室温后再打开密封袋以防水滴凝聚在冷板条上。
8. 任何反应试剂不能接触漂白溶剂或漂白溶剂所散发的强烈气体。任何漂白成分都会破坏试剂盒中反应试剂的生物活性。
9. 不能使用过期产品。
10. 如果可能传播疾病，所有的样品都应管理好，按照规定的程序处理样品和检测装置。
小韩在追星
免疫组化结果P63是什么意思？
avdin：抗生物素蛋白存在于卵白中的一种碱性糖蛋白，在生蛋清里可以找到还有大量的抗生素蛋白，与生物素（维生素B7）结合可使其难以被人体吸收。存在于卵白中的碱性糖蛋白，因它贪婪地（avidly）与生物素结合，故有此名（avidin）。给动物以生的卵白则产生生物素缺乏症，因为生物素蛋白与生物素结合，使之失活。分子量为68300，含4个亚单位。在体外（试管中）对含生物素的酶具有特异的抑制作用。Avidin 在相当广的温度及 pH 范围下皆很稳定。
Streptavidin：链霉亲和素(streptavidin下称SA)是与亲和素(avidin下称AV)有相似生物学特性的一种蛋白质，是streptomyces avidinii菌的分泌物，其分子量及结合生物素的能力与鸡蛋清中的亲和素相似，等电点6.0，非特异性结合远比亲和素低。SA 是Streptomyces avicllrdi菌培养过程中的分泌产物，主要通过2一亚氨基生物素亲和层析法提纯，1L培养液中含蛋白10~60mg 。
avdin和Streptavidin区别：
Avidin(亲和素)：是一种醣蛋白，被发现存在于鸡蛋卵白中，所以中文称之为「卵白素」，鸟类、爬虫类及两栖类的组织中亦存在。Avidin 总分子量为 67,000 Daltons，由四个完全相同的次体 (subunit)所组成，每个次体皆能与一分子的 biotin 结合。Avidin 含醣比例颇高，约占了总分子量的 10％。其 pI＝10-10.5，溶于水及含盐溶液中。Avidin 在相当广的温度及 pH 范围下皆很稳定。
Streptavidin(链霉亲和素): 由 Steptomyces Avidinii 中纯化出的蛋白质，同样能与 Biotin 做专一性结合，分子量为 60,000 daltons。Streptavidin 也是个由四个相同次体 (subunit)所组成的蛋白质，每个次体皆能与一分子的 biotin 结合，且其与 biotin 之键结亲和力相当于 Avidin-biotin 之亲和力。不过Biotin-Streptavidin 复合物对于 guanidine.HCl 将两者分开的抗拒能力较 Biotin-Avidin 还要强。此外，Streptavidin 不含醣且具有酸性的 pI = 5，正好与Avidin 相反。
由于链霉亲和素四价结合特性,目前商品化的试剂多采用链霉亲和素,而较少采用亲和素.。
小韩在追星
avdin和Streptavidin有什么区别
P63可以标记多种类型的细胞，鳞状上皮，肌上皮等。免疫组化，是应用免疫学基本原理--抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合的原理。
通过化学反应使标记抗体的显色剂(荧光素、酶、金属离子、同位素)显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质)，对其进行定位、定性及相对定量的研究，称为免疫组织化学技术(immunohistochemistry)或免疫细胞化学技术(immunocytochemistry)。
扩展资料：
免疫染色方法
1、直接法
荧光素直接标记特异性抗体（—抗）上，标记抗体与抗原结合（在切片上）荧光显微镜下观察→检测抗 原。
△ 酶标抗体要显示后镜检。
直接法优点：简单，时间短，特异性强。 缺点：灵敏度低，所需抗体量大（不经济）。 应用：基本不用！
2、间接法 荧光素标记在二抗上（二抗：抗产生一抗动物的 IgG抗体）。
※显色后镜检
特点：较直接法灵敏，可标记一种抗体→ 鉴定多种抗原。
3、非标记Ab桥法：
“桥法”是酶标记抗体的改进，经过三次抗体，其二抗为未标记桥抗体。
（1）单桥法
(2)双桥法
在三抗之后，将二抗和三抗再重复一次，
可增大染色强度。
★ 特别提示：注意动物种属关系。
4、PAP法（过氧化物酶—抗过氧化物酶法 Peroxidase anti—peroxidase method， PAP法）
~ 是桥法的改良，既先形成PAP复合物→抗原—抗体—抗IgG抗体—PAP复合物。
该法简化了操作步骤，提高了灵敏度，所染标本可长期保存。
5、ABC法（亲和素—生物素—过氧化物酶复合物法，Avidin—biotin—peroxidase Complex method，ABC 法）
Avidin： 亲和素，一种糖蛋白，其上有4个与生物素相结合的位点。
Biotin ： 生物素—维生素H，两者亲和力巨大，牢不可破。
ABC法与PAP法的区别是：以ABC复合物代替PAP复合物。
（1）ABC复合物的制备。
（2）ABC法反应原理。
6、SP或SAP法（过氧化物酶标记的链霉卵 白素或过氧化物酶标记的碱性磷酸酶染 色） Streptavidin/peroxidase or strepta- vidin/alkaline phosphatase）
参考资料：百度百科---免疫组化技术。