5x上样缓冲液加多少
刘耀文的大沙雕
钟意阿满
WB上样缓冲液加加多少是怎么确定的
我想说以下几点：
1.SDS-PAGE loading buffer一般配成2X 的,5X loading buffer确实过于粘稠,且SDS在低温下难溶于水,这就导致你配的buffer“摇都摇不动”了。
2.不知你为何要配那么多loading buffer（况且是5X的）,这些东西都是用量很少的,建议你少配些,比如……10 ml?。
3.以下就以2X loading buffer（配制10 ml）为例说明配制步骤。
首先配制1 mol/L Tris-HCl(pH6.8),10%SDS溶液.。
然后称取0.02 g溴酚蓝于小烧杯里,依次加入1 mol/L Tris-HCl(pH6.8) 1ml,10%SDS溶液4ml,甘油2ml,去离子水2ml,2-巯基乙醇1ml.混匀,分装成小份,-20度保存.用时溶解,与样品1:1混合上样.。
需要说明的是,2-巯基乙醇是还原剂,也可用前加入,以防失效.。
抱起亚轩找小葵
western蛋白上样量计算
上样缓冲液也有多种，一般是80ul的样本加20ul的上样缓冲液，这样基本上上样50ug的体积在10ul左右。
最好是测浓度，一般不超过30-40ug，上样缓冲液一般4×或者5×，这个没太大区别。
大圣杰锅是
“5x样品缓冲液”什么意思
1.平均值是复孔1和复孔2的总和除以2；
2.将算出的OD平均值（x）代入y=1196.1x-179.87，计算出样品孔的浓度（y）；
3.如果在测OD值时，样品孔的OD值大于A孔的OD值，就说明样品孔的浓度偏大（不能代入公式计算浓度），需要成倍稀释后再次测OD值，直到测得的样品OD值在I-A范围之间，即可代入公式计算浓度。根据经验，4°离心后的上清液颜色如果偏黄，蛋白浓度一般很大，需要稀释，蛋清色的上清会比偏黄色的上清浓度略低，所以建议加到96孔板里的蛋白上清液最好稀释一定比例，避免返工。这一步适用于加了稀释液、浓度偏大的样品，在得出y的基础上乘以稀释倍数，得到蛋白的真正浓度；
4.因为标准品的浓度单位是ug/ml，而后面的上样体积单位为ul，所以换算成ug/ul；
5.上样时不单单是蛋白上清液，还要加入成比例的上样缓冲液，这里以5X上样缓冲液为例（4ul的蛋白上清配1ul的上样缓冲液，4:1的关系），所以这一步的上样浓度就变成：蛋白浓度（ug/ul）乘以0.8；
6.上样的总量是一定的，可以是30ug，也可以是50ug，这个值可以通过曝光后条带的颜色深浅来改变总量的多少。上样体积就是上样总量÷上样浓度，这样就算出来每组样品需要加多少ul的上样体积跑胶啦。还有一点要注意的是，如果样品的浓度很低，测出来的体积就会大，因为一个梳子孔最多能注入25ul，尽量不要超过20ul为好，否则跑出来效果不佳。
小韩在追星
5x电泳缓冲液如何稀
5x意思是工作浓度的5倍
用的时候使得终浓度为1x就好了。
比如有些预混的PCR buffer是2x的。
对于25ul PCR体系来说，就是取12.5ul的2x buffer。
然后加引物、模板等组分，补水到25ul。
小韩在追星
电泳1升5XTBE缓冲液配置问题：以下两种方法对吗
你好，稀释5x电泳缓冲液，只需根据需要的稀释倍数向其中加入适当的蒸馏水混合均匀即可。
稀释的步骤为：计算，取液，移液，洗涤，定容，摇匀，装瓶并贴上标签。