calif-10

火箭新人巴丁格的历史？

Chase Budinger（蔡斯·巴丁格）

第二轮总第44顺位--现效力火箭队。

号码：10

位置: 前锋

身高/体重: 6-6 (1.99 m)/ 206.5 (93.6 kg)。

生日: May 22, 1988 (La Jolla, Calif.)。

高中: La Costa Canyon HS (Carlsbad, Calif.)。

大学: 亚利桑那

篮球生涯成绩:

大三时入选Pac-10联盟最佳阵容一队，连续第2年获得美联社评出的全美最佳阵容提名。大二时入选Pac-10联盟最佳阵容三队。2007年当选Pac-10联盟年度最佳新秀。当选2006年耐克世界青少年篮球锦标赛MVP。1697分排在亚利桑那队史个人总得分榜的第11位。

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篮球生涯成绩: 大三时入选Pac-10联盟最佳阵容一队，连续第2年获得美联社评出的全美最佳阵容提名。大二时入选Pac-10联盟最佳阵容三队。2007年当选Pac-10联盟年度最佳新秀。当选2006年耐克世界青少年篮球锦标赛MVP。1697分排在亚利桑那队史个人总得分榜的第11位。

大三 (2008-09):场均得到18.0分，6.2个篮板以及3.4次助攻，31场的得分达到两位数，其中有16场达到20+。单季共出赛1317分钟，排在校史的第1位。在与斯坦福以及加利福尼亚大学的比赛中连续得到赛季最高的28分。在与UAB的比赛中得到27分。在与德克萨斯A&M的比赛中送出生涯最高的7次助攻。在与俄勒冈以及华盛顿大学的比赛中双双得到25分。

大二 (2007-08): 场均得到17.1分（Pac-10联盟第8），5.4个篮板以及2.9次助攻。13场的得分达到20+。在与俄勒冈大学的比赛中得到赛季最高的30分。在与堪萨斯大学的比赛中投中6记三分球并得到27分。在与休斯敦大学的比赛中得到17分并抢下生涯最高的12个篮板。在与孟菲斯大学的比赛中得到20分以及6个篮板。在与USC的比赛中得到29分以及8个篮板。在NCAA锦标赛第一轮与西弗吉尼亚大学的比赛中得到23分以及5个篮板。

大一 (2006-07): 场均得到15.6分（Pac-10联盟第7），5.8个篮板以及2.0次助攻。84.5%的罚球命中率排在Pac-10联盟的第4位。6场的得分达到20+，两次拿下30+。在与北亚利桑那大学的比赛中得到生涯最高的32分并抢下7个篮板。5次拿下两双表现，其中在与俄勒冈大学的比赛中得到30分以及10个篮板。在NCAA锦标赛第一轮与普度大学的比赛中得到15分以及6个篮板。

特点: 有着白人球员中少有的出众弹跳，近筐附近的投篮把握很大。有一定的中远距离投篮水准，篮板球能力不俗。

关于个人：同时也是一名出色的排球手，曾于2006年当选全美最佳高中排球运动员。

NBA火箭队穿10号球衣的谁~？？

学校资料（按顺序）： Cate School 学校网址：http://www.cate.org 所在地区：加利福尼亚州 宗教背景：无 学校类型：男女合校 成立年份：1910年 寄宿年级：9 到 12 年级 学生总数：265人 留学生数：5% 寄宿学生：83% SAT平均分：1980 班级人数：10-12人 师生比例：1：5 AP课程：19 ESL课程：没有 SSAT：有要求 费用：寄宿费用-$38，100 走读费用-$29，350 申请截止日：1月15日 学校历史： Curtis Wolsey Cate，当他在1910年经过这个地方的时候，他开始创办寄宿学校，这所学校集聚了东海岸那些最好的寄宿学校所具备的学术优势，西方的冒险精神。凯特准备庆祝它的100周年纪念日时，这所学校在过去的一个世纪所发生的改变和现在它所保留的样子是同样显著的。这所学校已经从最初12个男孩的班级发展到现在有264个来自不同的州和不同国家的男孩和女孩。现在的校园有科学实验室和计算机实验室，美术厅和音乐演播室，齐全的田径运动设施，网络化宿舍，告别了学校没有电的时期。除了物质上的改变，在远见和精神上凯特学校仍然没有变化。 对于凯特学校的课程，宿舍生活，午后活动，凯特学校仍然坚持凯特先生支持那些优秀的教员的理想，凯特先生这样描述凯特，学生们应该感受到“学习的乐趣和成功的喜悦”。凯特是一个性格成熟发展的地方，教员们把它描述成“快乐的有机体”，学生知识的增加，不断的成熟和充满同情，因为他们了解到努力学习，为他人服务，和户外实践的重要性。 毕业生去向： 南加利福尼亚大学，加利福尼亚大学—伯克里，普林斯顿大学，纽约大学，科罗拉多大学，加利福尼亚大学—圣迭戈，哥伦比亚大学，耶鲁大学，加利福尼亚大学—圣克鲁兹， 美国撒切尔学校 The Thacher School [日期：2007年10月12日] 来源：达洋行留学咨讯网 作者：达洋行留学 [字体：大中小] 院校简介： 美国撒切尔学校 The Thacher School 创建于1889年的撒切尔学校位于美国加州风景秀丽的Ojai ValLey，是一所高质量的美国私立寄宿制中学。学校占地425英亩，现有学生230名（来自美国28个州和12个国家）。自成立一百多年来，学校除了为学生提供高质量的教育以确保学生能够以优异的成绩进入大学学习之外，学校还十分重视学生个人的全面发展以确保学生形成一个正确的人生观。学校期望学生在教室和实验室里是一个好学生的同时，还培养学生仁爱之心、良好的学习能力以及积极参与学校生活的乐观态度。 学校基本数据 学生与教师比例：5：1 平均每班人数：11 平均教师从教年数：17 硕士以上学历教师比例：70% 平均每年收到的入学申请数量：420 平均录取比例：20% 升学率高 撒切尔学校的毕业生一直是诸多美国和加拿大名校亲莱的对象，学校的升学率一直保持在98%以上，其中90%的学生被其前三个志愿院校录取（SAT平均成绩1950分）。在过去的5年中，75%的撒切尔学校毕业生进入包括斯坦福、南加州、哥伦比亚、加州大学伯克利分校、科罗拉多、达特茅斯、西北大学等美国一流高校。 费用情况： 寄宿生：38800美元/年（含学费、住宿和膳食费用） 报名费：100美元（不可退还） 入学条件 1） 中学成绩证明 2） SSAT成绩 3） 老师推荐信两封（数学和英语老师） 4） 电话面试或提供托福成绩 美国韦伯中学 Webb School [日期：2007年10月24日] 来源：达洋行留学咨讯网 作者：达洋行留学 [字体：大中小] 美国韦伯中学 Webb School 院校简介： 美国韦伯学校位于美国加州的克莱蒙镇，是一所高质量的美国私立中学。学校现有学生385名，男生205人，女生180人，其中国际学生占12%，主要来自澳大利亚，加拿大，中国，德国，新西兰，菲律宾，南非等国家和地区。自学校成立以来，学校为社会输出了许多优秀人才。除了确保学生以优异的成绩进入大学深造以外，韦伯学校还坚持换位思考为教学核心理念，实行个性化教育，鼓励学生的发现性思维，同时培养学生男女平等，尊重他人的优良传统。 相关信息 学校特色： 学校由两所学校合并而成：一是创立于1922年的男校（Webb School of California）；另一学校为创立于1981年的女校（Vivian Webb School）构成。现两所学校共处于一个校园。 学校基本数据 教师与学生比例：1：5 平均每班人数：15 教师人数：52 学士以上学历教师比例：100% 硕士以上学历教师比例：73% 升学 韦伯学校的升学率达100％。仅以2007年为例，87％的韦伯毕业生被第一志愿录取，94％进入美国一流大学。相形之下，韦伯学校进入斯坦福和常青藤大学的人数就是同类学校的四倍，借此再次证明了其高质量的教学水准。 费用情况： 寄宿生：41520美元/年 注：此费用所包含内容为学费，住宿费，餐饮费，节假日机场穿梭公车费，科学实验室费用，基础卫生服务及校内其他活动经费。 入学要求 1） 中学成绩证明 2） SSAT成绩 3） 老师推荐信两封（数学和英语老师） 4） 电话面试或提供托福成绩 美国雅典纳中学 The Athenian School [日期：2007年10月25日] 来源：达洋行留学咨讯网 作者：达洋行留学 [字体：大中小] 美国雅典纳中学 The Athenian School 院校简介： 1965年成立的美国雅典纳中学（The Athenian School）位于美国加州，占地75英亩，风景宜人，离太平洋和内华达山脉仅数小时车程，是旧金山海湾地区的一所著名中学，自学校成立以来，就以其新颖的课程安排和优异的教学成绩而著名。学校分为初中和高中两部，现有学生共455名，其中高中学生300人。由于学校一直注重教学质量，并且有意识的扩宽学生的自我认知和展望世界的能力，所以学校一直为西部各州高等院校协会和加州独立学校协会的大加赞赏。优秀的良师，田园诗般的学习环境，严谨而活泼的学习氛围，使得雅典纳中学一直成为众多学生和家长的首选。 相关信息 学校师资 学校教师70人，75％已取得硕士或博士学位，毕业院校多为哥伦比亚，哈佛，西北，普林斯顿，斯坦福，耶尔等美国著名高校，潜移默化的为学生树立了良好榜样。教师深厚的知识底蕴，热情投入的教学，耐心的指导一直为人称道。 学校基本数据 教师人数：70 高中教师与学生比例：1：9 平均每班人数：15 硕士以上学历教师比例：75% 国际学生比例：10％ 升学率 雅典纳中学（The Athenian School）每年的升学率几乎为100％，大部分为第一志愿录取。雅典纳中学毕业生（包括国际学生）平均SAT成绩为1250－1300。近四年的毕业生分别进入220所高校深造，其中著名的院校有：艾姆赫斯特学院，加州大学（伯克利、洛杉玑、圣地亚哥、河滨分校）、华盛顿，波士顿，普林斯顿，西北大学，哥伦比亚，康奈尔，杜克，斯坦福大学、耶鲁、威斯利学院等。 费用情况： 寄宿生：40950美元/年 报名费：75美元（不可退还） 注：其他费用如书本费，实地考察费和其他杂费每年另需800－1200美元 入学要求 1） 学生个人陈述 2） 父母情况调查表 3） 中学成绩单 4） TOEFL或SLEP或IELTS成绩 5） 老师推荐信两封（现任科老师） 圣他凯特利那中学 来源: 点击数: 录入时间:08-12-10 13:51:11 圣他凯特利那中学Santa Catalina school 美国最好的寄宿中学之一 美国平均SAT成绩排名第24 学校简介： 学生人数：283名女生 住宿生比例：48% 平均每班人数：14人 师生比为1:7 AP课程：17门 学生构成：来自美国17个州和7个国家（07-08年） 是否开设英文补习课程：无 报名截止日期：2月1日 录取率：74% 圣他凯特利那中学Santa Catalina创建于1950年，位于加州，距离旧金山125英里的蒙特里半岛。学校占地36英亩，环境优美，各项教学设备完善。圣他凯特利那中学是一所独立的天主教中学，高年级部（9至12年级）只招收女学生，允许寄宿或走读；低年级部（幼儿园学龄前至8年级）也同时招收男学生。学校承诺不会在种族、肤色、残障和国籍方面有任何歧视，致力于促进学生智力、精神修养、创造性、个性的平衡发展。圣他凯特利那高中要求毕业时学生应当修满4年的英语课程、3年的数学课程、3年某一门外语课程、3年的历史课程，和3年的科学实验课程。宗教学、艺术和体育是每一名学生每年必修的科目。高年级部26%的学生获得经济上的资助。 升学情况 该校大学升学率为100%，录取该校毕业生的学校包括：哈佛大学、斯坦佛大学、波士顿大学、纽约大学、杜克大学、康涅狄格学院、加州大学、狄金森学院、芝加哥大学等等。 费用情况： 报名费：150美元（不可退还） 学费：37,500美元（全日制寄宿生）；24,000美元（走读生） 入学要求 (1) 申请初表， (2) 招生办公室收到初表后发出的需要申请人完成的正式申请材料 (3) SSAT成绩 (4) 校园访问（面试） 美国伍德赛德中学 Woodside Priory School [日期：2007年11月23日] 来源：达洋行留学咨讯网 作者：达洋行留学 [字体：大中小] 美国伍德赛德中学 Woodside Priory School 院校简介： 伍德赛德中学（Woodside Priory School）位于加利福尼亚，是一所男女合校，提供6-12年级课程。学校占地60英亩，风景如画，交通便利，离旧金山仅30分钟路程，在田园般的学习环境中，能享受到大都市的生活。学校现有学生348人,男学生所占比例55.1％，女生为44.9％，学校秉承本笃会衣钵，致力于培养学生不断学习的精神，培养学生成为社会有用之人。热情，正直，个性，团结是学校培养学生的不变信念。 相关信息 基本数据 平均每班人数：14-18 师生人数比：1：9 教师人数：51 升学 伍德赛德中学的升学率为100％，毕业生一直为众多高校所瞩目，近四年录取高校有：哈佛大学，布朗大学，波士顿大学，乔治城大学，乔治华盛顿大学，宾西法尼亚大学，杜克大学，哥伦比亚大学，弗吉尼亚大学等等。 费用情况： 学费和住宿费： $38,950美元 校园商店押金：$400 美元 安全押金：$100美元 周末活动费：$600美元 总计：$40,050美元 入学要求 1. SSAT或ISEE成绩 2. TOEFL成绩 3. 学校申请表 4. 现任教师推荐信 5. 学校成绩表 6. 面试 美国史蒂文森中学 Stevenson School [日期：2007年10月24日] 来源：达洋行留学咨讯网 作者：达洋行留学 [字体：大中小] 美国史蒂文森中学 Stevenson School 院校简介： 史蒂文森中学创建于1952年，当时只有18名学生，6幢建筑和17英亩的占地。学校自成立以来在先生的带领下得到迅速发展，1964年学校因其优异的表现而被美国优等学校协会吸收为会员。经过半个多世纪的发展，史蒂文森中学现拥有730多名男女学生（其中高中部学生530人），占地近80英亩的一所高质量的美国私立寄宿制中学。学位位于美国加州著名的圆石滩，比邻世界著名的跳远山高尔夫球场，这里被认为是美国乃至世界上风景最优美的地方。自成立一百多年来，学校除了为学生提供高质量的教育以确保学生能够以优异的成绩进入大学学习之外，还创造各种条件，使每个学生的才能和天赋得到最大发展，从而培养出许多为社会发展作出杰出贡献的人才。 相关信息 学校理念 努力学习、全面发展。尊重自己与他人。 学校基本数据 学生与教师比例：12：1 平均每班人数：15 硕士以上学历教师比例：70% AP课程数量：18 近3年的平均申请人数：611 近3年的平均录取人数：156 升学率 历年来，史蒂文森中学毕业的学生以100%的升学率，进入美国、英国各大学就读，这些学校包括：加州大学（伯克利、洛杉玑、圣地亚哥等分校）、斯坦佛、南加州、波士顿、普林斯顿、哈佛、威廉姆斯、牛津、卡耐基.梅隆等名校。 费用情况： 寄宿生：40200美元/年（含学费和住宿费） 报名费：100美元 入学要求 1） 中学成绩证明 2） SSAT成绩或TOEFL成绩 3） 父母陈述 4） 自荐信 5） 老师推荐信两封（数学和英语老师） 6） 电话面试。

南海北部陆坡神狐海域HS-岩心表层沉积物古菌多样性

巴丁格第二轮总第44顺位

号码：10

位置: forward

身高/体重: 6-6 (1.99 m)/ 206.5 (93.6 kg)。

生日: may 22, 1988 (la jolla, calif.)。

高中: la costa canyon hs (carlsbad, calif.)。

大学: 亚利桑那/arizona 。

三分球命中率: 2006-07, 50-for-136 (.368); 2007-08, 73-for-192 (.380); 2008-09, 67-for-168 (.399). totals, 190-for-496 (.383).麦迪今天用一记干拔三分向球迷们宣告他的归来！ 在等待了9个多月后麦迪今天终于在对活塞的比赛中替补上场正式复出了，麦迪在首节还有7分44秒的时候替补出场，全场的球迷都一起为他鼓掌，麦迪今天只打了几分钟，2投1中拿下3分3篮板，在远离NBA赛场9个多月会T-MAC终于回来了。相信麦迪应该会越来越好的，他需要慢慢恢复，适应NBA的比赛，现在他上场多少时间得多少分大家不要要求太高，给他一个慢慢事宜的过程，相信他会回到最佳状态的！ 只要麦迪复出后尽快融入火箭的体系，加强和队友的交流与配合，相信麦迪能够帮助火箭提升实力，麦迪也能王者归来的！火箭队今天主场107-96击败来访的底特律活塞队，终结了活塞队的5连胜。值得一提的是今天麦迪身披3号球衣替补复出2投1中拿下3分3篮板。四节比分为29-19，27-28，25-21，26-28（火箭队在前），火箭目前总战绩为14胜10负，位列西部第六。由于阿里扎的禁赛今天新秀巴丁格迎来职业生涯第一个首发的机会，火箭队今天开局不错，上来就大比分领先活塞，最多领先活塞20分，最后一节活塞也未能将比分追近最终火箭拿下对手。布鲁克斯今天表现出色拿下23分10助攻，斯科拉23分8篮板，巴蒂尔4分4篮板，顶替阿里扎出场的新秀巴丁格拿下16分12篮板5助攻让大家眼前一i亮，火箭替补兰德里拿下19分3篮板，洛里7分6篮板。活塞方面上周最佳球员斯塔基17分5助攻，汉密尔顿21分4篮板4助攻，维拉纽瓦16分4篮板，杰雷科15分6篮板，大本3分8篮板。在姚明本赛季不能出场，麦迪还没有完全恢复的情况下，火箭的这支平民球队还是表现的依然努力，进攻打的是十分出色，相信在麦迪今天复出后逐渐调整自己的状态加强和队友的交流配合打好接下来的比赛。大家一起为火箭加油吧！

托福如何报名？出国留学手续是什么？（比如说美国）

张勇1，苏新1，陈芳2，蒋宏忱1，陆红峰2，周洋2，王媛媛1。

张勇（1981－），男，博士研究生，主要从事海洋地质微生物研究。

1.中国地质大学地质微生物实验室，北京　100083。

2.广州海洋地质调查局，广州　510760。

摘要：利用分子生物学技术，分析南海北部神狐海域天然气水合物潜力区HS-373PC岩心表层沉积物中古菌多样性，从沉积物中提取总DNA并扩增古菌16S rRNA基因序列，对克隆文库进行系统发育分析。结果显示：所有古菌序列均属于泉古菌（Crenarchaeota）和广古菌（Euryarchaeota）。其中泉古菌以C3为主要类群，另有少量序列属于marine benthic group (MBG)-B,MBG-C、marine crenarchaeotic group I (MGI）、marine hydrothermal vent group (MHVG）和novel group of crenarchaea(NGC）；广古菌以MBG-D为主，其他序列分别属于Unclassified Euryarchaeotic Clusters-1/2 (UEC-1/2）。

关键词：古菌多样性；16S rRNA；海洋沉积物；天然气水合物调查区；神狐海域；南海北部陆坡。

Archaea Diversity in Surface Marine Sediments from Shenhu Area,Northern South China Sea。

Zhang Yong1,Su Xin1,Chen Fang2,Jiang Hongchen1,Lu Hongfeng2,Zhou Yang2,Wang Yuanyuan1。

1.Geomicrobiology Laboratory,School of Ocean Sciences,China University of Geosciences,Beijing 100083,China。

2.Guangzhou Marine Geological Survey,Guangzhou 510760,China。

Abstract:Archaeal diversity in the surface sediments from Shenhu Area in South China Sea was studied with the use of 16S rRNA gene phylogenetic analysis.All the retrieved archaeal clone sequences could be grouped into Marine Benthic Group(MBG)-B,-C and-D,Novel Group of Crenarchaea,C3,Marine Hydrothermal Vent Group,Marine Crenarchaeotic Group I,and unclassified euryarhaeotic group,among which MBG-D and C3 were the most predominant groups in the Euryarchaeota and Crenarchaeota,respectively.The results indicated that archaea were abundant and diverse in surface sediments from the northern South China Sea.。

Key words:archaeal diversity; 16S rRNA; marine sediments; gas hydrate exploration area; shenhu area;northern south China Sea。

0 引言

海洋生态环境独特，具有高盐、高压、低温、寡营养和光照强度变化大等特点。生活在这一复杂环境中的微生物为适应独特环境条件，在物种类型、代谢类型、功能基因组成和生态功能上形成丰富的多样性[1]，其中原核微生物主要为古菌和细菌两大类群[2]。早期有关古菌存在及多样性的研究仅局限于温度、p H和盐度比较极端与厌氧的环境下，在这些极端环境中发现了超嗜热菌、极端嗜酸菌、极端嗜盐菌和产甲烷菌。目前已经从热泉、热液喷孔、硫质喷孔、盐湖、高碱湖、下水道消化池和瘤胃这些典型的环境中分离出了古菌[2]。随着分子生物学技术的发展，古菌研究的范围逐渐扩大，常见的环境比如海水[3]、盐湖水[4]和土壤[5-6]中，都发现有大量的古菌存在。随着研究领域的扩大，对古菌的分布、新陈代谢的多样性、从极端环境到普通环境的垂向变化以及在生态系统中所起作用的研究显得愈加重要。海洋深部生物圈内的古菌群落已经作为特定地质微生物标志，被用来指示过去和现代海洋的地球化学变化和地质环境的变迁[7]。

南海神狐海域天然气水合物调查研究区位于南海北部陆坡中段神狐暗沙东南海域附近，即西沙海槽与东沙群岛之间海域。根据野外地温梯度测量和室内沉积物样品的热导率测量结果以及钻探站位温度原位测量结果表明，神狐海域研究区的地温梯度为45～67.7℃/km，其热流和地温梯度处于中—低范围，该区域流体相对活跃，断层发育，有利于天然气水合物的发育[8]。2006年我国在该区实施钻探，已经成功获取了天然气水合物样品[8]。笔者对神狐海域天然气水合物调查区HS-373PC样品岩心表层5～20 cm深度沉积物开展了古菌多样性的调查，并初步探讨它们与沉积物中地质环境的相互作用。

1 材料方法

1.1 样品采集

2006年夏， “ 海洋四号”调查船在南海北部神狐海域（19°51.2803 ' N,115°12.0888 ' E）水深1 402 m处获得重力活塞岩心HS-373PC样品，岩心全长928 cm。本文通信作者随船考察，并采取微生物样。微生物取样间隔为50 cm，取样后在无菌箱中切除表面沉积物，内部样品置于无菌袋保存于液氮中，航次结束后用干冰运至实验室于－20℃保存。实验室操作时，切除表面沉积物以防止污染。

用于微生物计数的样品采集参考国际大洋钻探（ODP:ocean drilling program)201和204航次中所应用的微生物样品处理方法[9-10]，在无菌操作箱中进行：用灭菌手术刀切除岩心外部沉积物，灭菌注射器取约1 cm3样品，加入9 m L高温灭菌并过滤除菌（0.2 mm）的海水，加入终浓度为4％的甲醛固定，置于4℃保存。航次结束后低温运到实验室4℃保存。

1.2 微生物计数（acridine orange direct count,AODC）

样品细胞计数参照吖啶橙直接染色计数法[11]改进。样品漩涡震荡10 min，取1 m L加入9 m LPBS(0.145 mol/L Na Cl,0.0045 mol/L KH2PO4,0.0055 mol/L K2HPO4，灭菌）缓冲液，震荡5min,400r/min离心5 min，静置1 h充分沉淀，取上清液加入1％的吖啶橙5m L，黑暗中染色15 mm，过滤到孔径0.22μm的聚碳酸酯膜（Whatman,UK）上，用10 m L PBS缓冲液冲洗滤膜，置于载玻片上，于荧光镜下观察计数。

1.3 DNA提取与16Sr DNA的扩增。

称取约1 g样品，使用Ultra Clean soil DNAkit (Mo Bio,Solana Beach,Calif.,US）试剂盒提取总DNA，溶于灭菌的纯水中。

古菌扩增引物为：Arch21F(5’－TTC YGG TTGATC CYG CCRGA-3’，Y=A,C or G;R=A or G）和Arch958R(5’－YCC GGC GTT GAM TCCATTT-3’，M=Aor C)[3]。PCR反应条件：95℃变性7min，然后94℃变性30 s,54℃退火30 s,72℃延伸1.5min,45个循环，最后72℃延伸10 min。产物经1％的琼脂糖凝胶电泳检测后切胶回收。

1.4 克隆文库的构建与5序列分析。

纯化回收后的PCR产物连接到p GEM-T Easy Vector(Promega,US）上，转化Escherichiacoli.JM109感受态细胞。取适量转化后培养的细胞涂到含氨苄青霉素、X-Gal和IPTG的LB平板上， 37℃培养过夜，12～16 h后取出，置于4℃冰箱。

随机挑选部分白色转化子，接种到上述LB平板上，37℃培养后，使用引物M13-RV (5'－CAG GAA ACA GCT ATG AC-3＇）和M13-47(5'－GTT TTC CCA GTC ACG AC-3＇）做菌落PCR。反应条件如下：95℃变性10min，加入1.25U Taq酶，然后94℃变性30 s,54℃退火30 s,72℃延伸2min,35个循环，最后72℃延伸10min。扩增产物经1％的琼脂糖凝胶电泳检测后，挑选部分样品进行测序。

所得序列用Sequencer 4.8(Gene Codes Corporation,US）软件进行分析，经Bio Edit软件编辑后，以97％的序列相似性作为划分标准[12]，使用DOTUR软件（http://www.plantpath.wisc.edu/fac/joh/DOTUR.html）选出运算分类单位（operational taxonomic unit，或OTU），用a Rarefact Win软件（http://www.uga.edu/～strata/software.html.）得出饱和曲线。所得OTU对应序列输入NCBI数据库，在线使用BLAST (basic local alignment search tool）对比序列，采用Neighbor-Joining建树方法构建系统发育树。

本研究中所得到的古菌16Sr DNA序列在Gen Bank核酸数据库里的接受序列号为HS373A1－HS373A98(FJ896063-FJ896103); HS373A107-HS373A16(GU181294-GU181316）。

2 结果与分析

2.1 沉积物微生物计数

表层沉积物中的总微生物计数使用吖啶橙染色直接计数法，计数结果显示微生物的数量约为1.69×107cells/g沉积物（湿重）。

2.2 古菌多样性分析

所测序列经筛选后得到132个有效序列，共分为64个OTU。文库覆盖率C=1－(n/N） （其中n为OTU中只出现一个克隆子的数目，N为总序列数）为68.2％。使用a Rarefact Win软件分析得到克隆文库的饱和曲线（图1）。

图1 南海北部HS-373PC岩心表层沉积物中古菌16SrRNA基因序列饱和曲线。

该132个序列均属于未培养类型，同源序列大多数来自海洋沉积物，分别属于泉古菌（Crenarchaeota）和广古菌（Euryarchaeota）两大类（图2）。其中泉古菌以C3[13]为主（占总序列的24％），其他序列属于marine benthic group (MBG)-B[14],MBG-C[15],marine crenarchaeotic group Ⅰ（MGI)[16],marine hydrothermal vent group (MHVG)[17]和novel group ofcrenarchaea(NGC)[15]。广古菌以MBG-D[13]为主（占总序列的16％），其他序列属于unclassified euryarchaeotic clusters (UEC)-1/2。各类群所占比例见图3。

泉古菌中包含92个克隆序列（占总序列的70%）。其中以C3为主要类群，包含32个克隆，同源序列来源广泛，其中大多数来自南海沉积物中，相似性在97％～99％之间。其他同源性最高的序列来自太平洋秘鲁边缘海（ODP Leg 201）和喀斯喀特边缘海（ODP Leg 204）含有水合物的沉积物[13]、墨西哥湾沉积物（AB448792）和维多利亚港沉积物（EF203609）。MBG-B（也称为Deep-Sea Archaeal Group,DSAG)[17-19]类群最先发现于深海沉积物和热液口，该类群广泛存在于多种深海环境中[20]，文库中有2个克隆属于该类群，同源序列来自鄂霍次克海冷泉沉积物[15]、墨西哥湾沉积物（IODP Site 1230）和Juan de Fuca海岭沉积物[15]，相似性为98％～99％，这几个地区沉积物均发现水合物存在。20个克隆属于MBG-C，同源序列（相似性为95％～99％）来自深海沉积物和红树林土壤。12个克隆属于MGI，同源序列源自南海沉积物[16,21]和北冰洋沉积物（FJ571813），相似性在97％～99％之间。有4个克隆属于MHVG，与来自墨西哥湾沉积物的克隆（AB432999）相似性最高（99%）。NGC类群有20个克隆，其中相似性最高（相似性98％）的序列（EU713901）来自鄂霍次克海[15]，其他克隆相似性最高的序列（DQ984855）和（AB433026）分别来自南海沉积物和墨西哥湾深海沉积物，相似性仅为89％和92％。

广古菌包含40个（占总序列的30％）克隆序列。其中MBG-D是优势类群，有21个克隆属于该类群，分为13个OTU。其中大部分克隆同源序列来源于南海[16,21]、智利瓦斯科湖、Skan湾[22]、墨西哥湾、日本南海海槽[23]、鄂霍次克海[15]和秘鲁边缘（ODP Leg 201）有机含量丰富不含水合物的深海沉积物[13]。另2个克隆相似性最高的序列（AF068817）来自大西洋中脊热压喷口[24]，同源性只有86％。19个克隆组成UEC类群，9个克隆属于UEC-1，同源序列来源于南海沉积物、Baby Bare海湾热液喷口[25]和Skan湾[22]。10个克隆属于UEC-2，相似性最高的序列来源于南海[26]和Santa Barbara海盆[27]，相似性在96％～99％之间。

3 讨论

海底沉积物表层有机质含量相对比较丰富，为微生物的生长繁殖提供充足的物质能量。据统计太平洋表层沉积物中微生物（包括细菌和古菌）丰度为108～109cells/cm3沉积物[28]，有活性的微生物丰度为108cells/cm3沉积物[29]。本文HS-373PC岩心表层沉积物使用吖啶橙染色计数获得的微生物的数量，与南海南沙盆底陆坡沉积物中使用荧光原位杂交计数的结果[16]相比数量偏低。

图2 南海北部HS-373PC岩心表层沉积物中古菌16SrRNA基因序列系统发育树。

图3 南海北部HS-373PC岩心表层沉积物古菌文库中各类群所占的比例。

（其中“Un”为未分类的类别）

HS-373PC岩心的表层沉积物中古菌多样性虽然比较高，但从序列类别来说，大部分所在的类群在其他海区沉积物中都有发现[13,15,17-20,22-24]。尤其是大多数序列与南海其他地区沉积物中所报道的古菌类群[16,21,26]具有很高的相似性。而且在群落组成结构等方面比较起来还是有所不同。

与南海其他地区古菌类群相比，如在西沙海槽表层沉积物中古菌以MGI为主要类群（49.2%），其他包括TMEG(terrestrial miscel1aneous euryarch-aeotic group）、MBG-A/B/D、C3和NEG(novel euryarchaeotic group）类群以及17％的UEC克隆[21]。南海琼东南沉积物中古菌以MCG和MBG-B(DSAG）为主要类群（各占27％），其他还存在MBG-D、SAGMEG、TMEG和3个克隆的甲烷八叠球菌（Methanosarcinales）以及29％的UEC克隆[26]。MGI类群常发现于海洋和陆地环境，在海洋环境中，广泛分布于表层和次表层沉积物中，该类群可能兼性自养或者代谢类型多样[30]。本文神狐海域水合物潜力区的表层沉积物中的古菌，也有MGI类群出现，该类群所占比例仅为9％。MBG-B类群最先发现于热液口深海沉积物，目前在深海海底沉积物中均发现此类群[20]，该类群在底部甲烷上涌流的上层硫酸盐还原带沉积物中含量丰富，可能在硫酸盐还原和甲烷氧化中起重要作用[31]；此类群在南海琼东南盆地表层沉积物中所占比例较高，在神狐海域表层沉积物中，只有2个克隆出现，测试表明该深度甲烷体积分数较低（约40×10-6），而硫酸根质量浓度较高（2 655 mg/L），说明该深度甲烷氧化与硫酸盐还原程度还比较低。

与上述南海所报道2个地区古菌多样性相比，神狐海域HS-373PC表层沉积物中古菌C3类群的克隆明显占优。该类群尚未有培养种类，具体代谢类型还不清楚。类群中相似性最高的序列来自太平洋秘鲁边缘（ODP Leg 201）和喀斯喀特边缘海（ODP Leg 204）含有水合物的沉积物。

西太平洋日本南海海槽含有天然气水合物的沉积物中，古菌多样性很低，只发现有3种类群的古菌类群，分别与脱硫球菌、热网菌和热球菌相似，没有发现其他类群[32]。东太平洋美国俄勒冈州外海水合物海岭的ODP 204航次1244、1245和1251站位有水合物存在的表层沉积物岩心中，古菌以MBG-B(DSAG）类群为主[13]（约占50％～100%）。而位于东太平洋赤道海域ODP 201航次几个地质环境不同钻探站位的表层沉积物中古菌群落结构不同，其中1230站位（含天然气水合物）古菌以MBG-B(DSAG）类群为主[13];1227站位（不含水合物但有机质含量丰富）古菌以MCG和SAGMEG为主要类群，不含MBG-B(DSAG）类群[13]；而1225站位（不含天然气水合物且有机含量低）古菌以MGI和MBG-A为主要类群，但含少量MBG-B(DSAG）类群[13]。由此可见，即使是在发现了天然气水合物的地区，表层样中古菌的类型和群落结构也随海域或同海域不同站位地质环境而变化。神狐海域HS-373PC表层沉积物古菌的优势类群和上述地区明显不同。前人对南海表层沉积物有机质含量的总结表明，神狐地区属于有机质含量较低的地区[33]。因此，如果就HS-373PC表层沉积物中有机质含量低而古菌群落含少量MBG-B类群这2点来看，和东太平洋赤道海域ODP 201航次1225站位具有一定的相似性。

该岩心采集的区域属于已确定的天然气水合物潜力区，一系列的数据强烈暗示该区沉积物深部存在着天然气水合物[8]。但对该岩心表层沉积物中古菌多样性分析后发现，古菌中没有明显指示天然气水合物存在的类群出现，可能是本文所取的样品处于沉积物表层，各种参数变化不明显，在古菌多样性上没有明显的显示。对于HS-373PC岩心中微生物多样性和地质环境的关系进一步的探讨，还有待于建立在未来获得更多微生物和地质环境分析的基础上。

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