dntp是deoxy-ribonucleoside triphosphate(脱氧核糖核苷三磷酸)的缩写。是包括dATP, dGTP, dTTP, dCTP,dUTP等在内的统称。
d指deoxidize,deoxy-,脱氧。N代指含氮碱基,代表A,T,G,C,U等中的一种。TP指triphosphate,三磷酸盐。dNTP在生物DNA,RNA合成中,以及各种PCR(RT-PCR,Real-time PCR)中起原料作用。
dNTPS作用是能在Taq酶的作用下与模版DNA进行复制,如果直接用脱氧核苷算的话是没有多余的两个磷酸基团的,都知道ATP含有高能磷酸键,dNTPs也含有高能磷酸键,这样就可以在PCR体系中提供能量。
在PCR反应中,使用低dNTP浓度,可减少非靶位置启动和延伸时的核苷酸错误掺入。一般可根据靶序列的长度和组成来决定最低dNTP浓度。例如在100μl的反应体系中,4种dNTP的浓度为20μmol每L,可基本满足合成2.6μg,DNA或10pmol每L的400bp序列。
使用低dNTP浓度(每种dNTP浓度为2μmol每L),能够高度灵敏地(1/107)扩增ras基因点突变的等位基因。
dntp指的是脱氧核糖核苷三磷酸。N是指含氮碱基,代表变量指代A、T、G、C、U等中的一种。在生物DNA合成中,以及各种PCRRT-PCRreverse transcription PCR,Real-time PCR中起原料作用。
dNTP溶于pH为7.0的NaOH贮存液中最初的贮存液可稀释到10mol/L分装后存放在-20℃冰箱中。dNTP使用浓度在20200μmol/L之间。4种dNTP必须等浓度配合以减少错配误差。
使用浓度
dNTP在PCR反应中,使用低dNTP浓度,可减少非靶位置启动和延伸时的核苷酸错误掺入。一般可根据靶序列的长度和组成来决定最低dNTP浓度。
例如在100μl的反应体系中,4种dNTP的浓度为20μmol/L,可基本满足合成2.6μg DNA或10pmol/L的400bp序列。使用低dNTP浓度每种dNTP浓度为2μmol/L,能够高度灵敏地1/107扩增ras基因点突变的等位基因。
dNTP,deoxy-ribonucleoside triphosphate(脱氧核糖核苷三磷酸)的缩写。
是包括dATP, dGTP, dTTP, dCTP,等在内的统称,N是指含氮碱基,代表变量指代A、T、G、C等中的一种。在生物DNA合成中,以及各种PCR(RT-PCR(reverse transcription PCR)、Real-time PCR)中起原料作用。
dNTP代表脱氧核糖核苷酸三磷酸。每个dNTP由磷酸基团,脱氧核糖和含氮碱基组成。有四种不同的dNTP,可分为两组:嘌呤和嘧啶。
一、嘌呤
dATP(脱氧腺苷5'-三磷酸)和dGTP(脱氧鸟嘌呤5'-三磷酸)构成嘌呤。
腺嘌呤和鸟嘌呤是嘌呤中的基质,都具有双环结构。
二、嘧啶
dTTP(脱氧胸苷5'-三磷酸)和dCTP(脱氧胞苷5'-三磷酸)构成嘧啶。
胸腺嘧啶和胞嘧啶是嘧啶中的特征,它们都具有单环结构。
DNA和RNA合成
DNA 复制和转录的细胞过程分别涉及 DNA 和 RNA 合成。DNA 合成使用 dNTPs 作为底物,而 RNA 合成使用 NTPs 作为底物。
NTPs 不能直接转换为 dNTPs。DNA含有四种不同的含氮碱基:腺嘌呤、鸟嘌呤、胞嘧啶和胸腺嘧啶。RNA 还含有腺嘌呤、鸟嘌呤和胞嘧啶,但用尿嘧啶代替胸腺嘧啶。
因此,DNA 合成需要 dATP、dGTP、dCTP 和 dTTP 作为底物,而 RNA 合成需要 ATP、GTP、CTP 和 UTP。
核酸合成由分别用于 DNA 和 RNA 合成的DNA 聚合酶或RNA 聚合酶催化。这些酶将生长中的核苷酸链的 3' 碳上的游离-OH基团与下一个 (d)NTP 的 5' 碳上的 α-磷酸基团共价连接,释放 β- 和 γ- 磷酸基团焦磷酸盐( PPi)。
这导致了两个 (d)NTPs 之间的磷酸二酯键。PPi 的释放提供了反应发生所需的能量。
以上内容参考:百度百科-dNTP。
dNTP,deoxy-ribonucleoside triphosphate(脱氧核糖核苷三磷酸)的缩写。是包括dATP, dGTP, dTTP, dCTP,等在内的统称,N是指含氮碱基,代表变量指代A、T、G、C等中的一种。在生物DNA合成中,以及各种PCR(RT-PCR(reverse transcription PCR)、Real-time PCR)中起原料作用。
形成DNA骨干
如前所述,DNA的主链由交替的磷酸和脱氧核糖基团组成。在dna的一条链上的相邻核苷酸之间形成的键是磷酸二酯键。当一个脱氧核糖的5'或3'碳原子与第一个磷酸上的氧键合时形成。这是从每个核苷酸中除去二磷酸的缩合反应。这就是为什么DNA中发现的核苷酸实际上是dNMPs(脱氧核糖核苷酸单磷酸酯)。
dNTP是脱氧核苷三磷酸百(含脱氧核糖);NTP是核苷三磷酸(含核糖)。
它们是由三个磷酸分子和一个(脱氧)核苷酸组成的,N的意思是碱基,比如说dATP就是腺嘌呤脱氧核苷三度磷酸。
在DNA复制过程中,dNTP的一个焦磷酸尾巴掉下来了,变成了所谓的dNMP,同时和度上一个碱基连起来了。掉下来的这个焦磷酸分子水解,为DNA聚合酶继续知工作提供了能量。
储存液
dNTP溶于pH为7.0的NaOH贮存液中,最初的贮存液可稀释到10mol/L,分装后存放在-20℃冰箱中。dNTP使用浓度在20~200 μmol/L之间。4种dNTP 必须等浓度配合以减少错配误差。
使用浓度
在PCR反应中,使用低dNTP浓度, 可减少非靶位置启动和延伸时的核苷酸错误掺入。一般可根据靶序列的长度和组成来决定最低dNTP浓度。例如在100μl 的反应体系中,4种dNTP的浓度为20μmol/L,可基本满足合成2.6μg DNA或 10pmol/L 的400bp序列。