光的波动性限制了显微镜的分辨率。显微镜空间分辨率极限大约是光波的半个波长,约为200nm(可见光范围400-750nm)。近二十年显微镜的发展,已经大大提高了显微镜的分辨率。出现了多种显微技术,使光学显微镜的空间分辨率,超越了理论的光学分辨率极限。这些技术统称为超高分辨率显微技术(Super Resolution Microscopy,SRM)。
一、分辨率
即使是很小的物体(如1nm直径),在显微镜下它的图像也将显著扩散。Abbe首先提出这种现象是光的衍射特性造成的,取决于光波长和显微镜物镜的有限尺寸。一个无限小物点在像平面处的光强分布函数称为点扩散函数(point spread function,PSF)。PSF通常在X-Y平面上呈径向对称分布,但沿Z光轴方向具有明显的延伸。右图显示相对于物平面,从侧面观察的亮度分布。根据瑞利(Rayleigh)准则,两点之间可分辨的最小距离相当于PSF的宽度。
根据瑞利准则,传统光学显微镜的分辨率极限遵循以下公式:
侧向分辨率: dx,y=0.61λ/NA; 轴向分辨率: dz= 2λ/ NA2 。
λ表示光的波长,NA是透镜的数值孔径,NA=n sin u/2。n是透镜和样品之间的介质折射率,u是孔径角。这种限制就是光衍射极限,是改进分辨率的起点;PSF越窄,获得的分辨率越高。
二、XY平面超高分辨率显微技术 。
(一)PALM 和STORM。
2002 年,Patterson 和Lippincott-Schwartz首次利用一种绿色荧光蛋白(GFP)的变种(PA-GFP)来观察特定蛋白质在细胞内的运动轨迹。这种荧光蛋白PA-GFP 在未激活之前不发光,用405 nm 的激光激活一段时间后才可以观察到488 nm 激光激发出来的绿色荧光。德国科学家Eric Betzig 敏锐地认识到,应用单分子荧光成像的定位精度,结合这种荧光蛋白的发光特性,可以来突破光学分辨率的极限。2006 年9 月,Betzig和Lippincott-Schwartz 等首次在Science 上提出了光激活定位显微技术(photoactivated localization microscopy, PALM)的概念.其基本原理是用PA-GFP 来标记蛋白质,通过调节405 nm 激光器的能量,低能量照射细胞表面,一次仅激活出视野下稀疏分布的几个荧光分子,然后用488 nm 激光照射,通过高斯拟合来精确定位这些荧光单分子。在确定这些分子的位置后,再长时间使用488nm激光照射来漂白这些已经定位正确的荧光分子,使它们不能够被下一轮的激光再激活出来。之后,分别用405 nm 和488 nm 激光来激活和漂白其他的荧分子,进入下一次循环。这个循环持续上百次后,我们将得到细胞内所有荧光分子的精确定位。将这些分子的图像合成到一张图上,最后得到了一种比传统光学显微镜至少高10 倍以上分辨率的显微技术。PALM 显微镜的分辨率仅仅受限于单分子成像的定位精度,理论上来说可以达到1 nm 的数量级。2007 年,Betzig 的研究小组更进一步将PALM 技术应用在记录两种蛋白质的相对位置,并于次年开发出可应用于活细胞上的PALM 成像技术来记录细胞黏附蛋白的动力学过程。
PALM 的成像方法只能用来观察外源表达的蛋白质,而对于分辨细胞内源蛋白质的定位无能为力。2006 年底,美国霍华德- 休斯研究所的华裔科学家庄晓薇实验组开发出来一种类似于PALM 的方法,可以用来研究细胞内源蛋白的超分辨率定位。他们发现,不同的波长可以控制化学荧光分子Cy5 在荧光激发态和暗态之间切换,例如红色561 nm 的激光可以激活Cy5 发射荧光,同时长时间照射可以将Cy5 分子转换成暗态不发光。之后,用绿色的488 nm 激光照射Cy5 分子时,可以将其从暗态转换成荧光态,而此过程的长短依赖于第二个荧光分子Cy3 与Cy5 之间的距离。因此,当Cy3 和Cy5 交联成分子对时,具备了特定的激发光转换荧光分子发射波长的特性。将Cy3 和Cy5 分子对胶联到特异的蛋白质抗体上,就可以用抗体来标记细胞的内源蛋白。应用特定波长的激光来激活探针,然后应用另一个波长激光来观察、精确定位以及漂白荧光分子,此过程循环上百次后就可以得到最后的内源蛋白的高分辨率影像,被他们命名为随机光学重构显微技术(stochastic optical reconstruction microscopy, STORM)。2007年,他们进一步改进STORM 技术,发展了不同颜色的变色荧光分子对,可以同时记录两种甚至多种蛋白质的空间相对定位,从而阐明笼形蛋白clathrin 形成的内吞小泡与细胞骨架蛋白之间的精确空间位置关系,两种颜色的分辨率都可以达到20~30 nm。但是,STORM 方法也存在缺陷,由于用抗体来标记内源蛋白并非一对一的关系,所以STORM 不能量化胞内蛋白质分子的数量,同时也不能用于活细胞测量。
(二)STED
不管是PALM 还是STORM 的超分辨率成像方法,其点扩散函数成像仍然与传统显微成像一致.由于需要反复激活- 猝灭荧光分子,所以使得实验大多数在固定的细胞上完成.即使是在活细胞上进行的实验,其时间分辨率也较低。2000 年,德国科学家Stefan Hell 开发了一种超高分辨率显微技术,其基本原理是通过物理过程来减少激发光的光斑大小,从而直接减少点扩散函数的半高宽来提高分辨率。当特定的荧光分子被比激发波长长的激光照射时,可以被强行猝灭回到基准态。利用这个特性,Hell 等开发出了受激发射损耗显微技术(stimulated emission depletion, STED)。其基本的实现过程就是用一束激发光使荧光物质(既可以是化学合成的染料也可以是荧光蛋白)发光的同时,用另外的高能量脉冲激光器发射一束紧挨着的、环型的、波长较长的激光将第一束光斑中大部分的荧光物质通过受激发射损耗过程猝灭,从而减少荧光光点的衍射面积,显著地提高了显微镜的分辨率。
应用STED 成像,点光源的光斑大小直接发生改变, 其半高宽大小从传统的λ =nsinα 成 λ =2nsinα(1+I/Isat)^1/2,其中I 是STED 激光器的最大聚焦强度,而Isat则是当受激荧光强度被减少到1/e 时的STED 激光的强度特征值。由此公式可看出,当I/Isat的值趋近无穷大时,STED 成像的点光源的半高宽趋近于0,亦即分辨率不再受光的衍射过程所限制。
STED 成像技术的最大优点是可以快速地观察活细胞内实时变化的过程,因此在生命科学中应用更加广泛。例如,应用成熟的STED 显微成像技术发现,海马神经元上囊泡蛋白synatotagminⅠ在各种刺激后都以一种“簇”的形式存在于神经突触前端膜上,这首次揭示了这种膜蛋白以集合的形式存在于细胞质膜上然后被统一回收的方式。之后Hell等又进一步发展了这种方法,使之可以用于EGFP标记的信号和多种颜色的超分辨率检测。目前,STED 作为一种成熟的方法,已经可以高速地监测活细胞内高分辨率图像。例如在2008 年Science 上发表的文章表明,应用STED 技术已经可以以视频的速度(每秒28 帧)来采集记录神经细胞内突触小泡的高分辨率图像(50 nm)。目前,STED 成像的主要缺陷在于光路复杂,设备昂贵,对系统的稳定性要求很高。
(三)SSIM
改变光学的点扩散函数来突破光学极限的另一个方法是利用饱和结构照明显微技术(saturated structure illumination microscopy, SSIM)。早在1963年,Lukosz 和Marchand就提出了特定模式侧向入射的光线可以用来增强显微镜分辨率的理论。2005 年,加州大学旧金山分校的Gustafsson 博士首先将非线性结构性光学照明部件引入到传统的显微镜上,得到了分辨率达到50 nm 的图像。SSIM技术的原理是将多重相互衍射的光束照射到样本上,然后从收集到的发射光模式中提取高分辨率的信息。
今天我们都知道植物体是由细胞构成的,但这一结论的得出并非那么容易。340多年前,英国皇家科学学会的Robert Hooke 用荷兰人Leeuwenhoek发明制作的显微镜观察了一小片软木,看到软木是由许多蜂窝状的小格子组成,Hooke将每一个格子称作“细胞”。1838年德国植物学家Matthias Schleiden才提出,所有植物体都是由细胞构成的。组成植物体的细胞的形状和大小是各不相同的,其不同部位的细胞,形状和大小与它们行使的功能密切相关。大多数高等植物细胞的直径通常约在10-200微米之间。性状有多面体、棱柱体、圆筒形、纺锤形、砖形、圆球形、甚至星形等。植物细胞的形状大小尽管多种多样,但基本结构是一样的。例如一切活细胞都含有原生质和其外面的细胞壁。坚硬的细胞壁保护着原生质体,并且维持着细胞的一定形状,其主要成分是纤维素。细胞壁是植物细胞独有的,动物细胞没有细胞壁。植物细胞还含有质体,是植物细胞生产和储存营养物质的场所。最常见的质体是叶绿体,它是专门进行光合作用的细胞器。动物细胞中不含有质体。大多数植物细胞都含有一个或几个液泡,液泡中充满了液体。液泡的主要作用是转运和储藏养分、水分和代谢副产物或代谢废物,即具有仓库和中转站的作用。除此外,植物细胞中还有线粒体、内质网、高尔基体、核糖体、圆球体、溶酶体、微管、微丝等细胞器。植物细胞中最重要的部分要数细胞核了,在光学显微镜下,细胞核可明显地分为核膜、核仁和核质三部分。核是遗传物质主要分布中心,同时也是遗传与代谢的控制中心。
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细胞壁分为3个部分:
1.胞间层。
2.初生壁。
3.次生壁。
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液泡(vacuole)
幼小的植物细胞(分生组织细胞),具有许多小而分散的液泡,在电子显微镜下才能看到。以后随着细胞的生长,液泡也长大,互相并合,最后在细胞中央形成一个大的中央液泡,它可占据细胞体积的90%以上。
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关于去掉植物细胞壁的纤维素酶和果胶酶的试剂.。
要分离植物原生质体,必须去掉由果胶质、纤维素和半纤维素及木质素等构成的细胞壁。在本世纪前期是采用分离机械法。即将叶肉细胞,愈伤组织和液体悬浮培养细胞置于高渗的糖溶液中,使之质壁分离,原生质体收缩成球形。然后用剪刀剪碎组织,就可切开细胞壁获得少量完整的原生质体。不过这种方法分离的原生质体太少,而且只能适于部分组织,Cocking发明的酶解法,开创了大量分离原生质体的新技术,所以目前普遍采用酶分离法来获得原生质体。
一、植物材料
一般来说,植物各个器官,如:根、茎卅、花、果实、种子及愈伤细胞和悬浮细胞等都可作为分离原生质体的材料。但是,要获得高质量的原生质体,则须选用生长旺盛、生命力强的组织作材料。材料的生理状况是原生质体质量的决定性因素之一。
1.细胞悬浮培养物
在建立细胞悬浮培养物之前,需提前培养愈伤组织。即取用成熟种子胚、未成熟胚、幼穗、花药、胚芽鞘或幼叶,经无菌消毒后,在26℃黑暗条件下,在含2,4- D 2~4mg/L的 MS固体培养基上,诱导愈伤组织,每隔2~4d转接一次。从中选出增殖较快而且呈颗粒状的愈伤组织,或经继代培养一次后,转移到液体培养基的100ml三角瓶中进行悬浮培养。具体方法是用旋转式振荡器,速度控制在80~? 120r/min,在 25±1℃下暗培养。悬浮培养初期应每隔3d继代一次,一个半月后,吸取4~5ml悬浮细胞转到250ml三角瓶的40rnl新鲜培养中,以后每隔7d继代一次。通常经悬浮培养3~4月后,悬浮培养细胞的大小变得较为一致,且细胞质变得较浓时,可用作分离原生质体。
2.叶肉细胞
叶肉细胞是分离原生质体的最好的细胞材料,用叶片的薄壁组织作为材料来源,既要考虑植株的生长环境,又要考虑叶片的年龄及其生理状态对原生质体分离的影响。取生理状态适宜的叶片,有利于原生质体的细胞再生和细胞分裂。要获得良好的培养? 材料,下列外界因素是考虑的重要因子:
(1)光强为3000~6000lx。
(2)温度为20~25℃培养。
(3)相对湿度在60%~80%左右。
植物的其他器官也可用于分离原生质体,如用花粉四分体和花粉壁细胞。?。
3.植物材料的预处理
对原生质体材料进行预处理能提高原生质体的分裂频率;也可以逐步提高植物材料的渗透压,以适应培养基中的高渗环境。这些处理包括:暗处理。预培养、低温处理等。把豌豆的枝条取下后,在分离原生质体前,先让材料在黑暗中的一定湿度条件下放1~2d,这样得到的原生质体存活率高,并能继续分裂;在羽衣甘蓝叶肉组织原生质体分离和培养中,先去掉叶片的下表皮,再在诱导愈伤组织的培养基中预培养7d,然后再去壁。经预培养的叶片分离的原生质体高度液泡化,叶绿体也解体;龙胆试管苗的叶片只有用4CC低温处理后分离得到的原生质体才能分裂。在很多情况下材料不必经过专门的预处理。
二、酶
1.酶的种类
构成植物细胞壁的三个主要成分是:①纤维素,占细胞壁干重的25 %至50%不等;②半纤维素,平均约占细胞壁干重的53%左右;③果胶质,一般占细胞壁的5%。分离原生质体最常用的酶有纤维素酶、半纤维素酶和果胶酶。
纤维素酶是从绿色木霉中提取的一种复合酶制剂,主要含有纤维素酶C;,作用于天然的和结晶的纤维素,具有分解天然纤维素的作用,还含纤维素酶CX,作用于定形的纤维素,可分解短链纤维素,另含有纤维素二糖酶、木聚糖酶、萄聚糖酶、果胶酶、脂肪酶、磷脂酶、核酸酶、溶菌酶等,总体作用是降解纤维素,得到裸露的原生质体。
果胶酶是从根霉中提取的,使细胞间的果胶质降解,把细胞从组织内分离出来。半纤维素酶制剂可以降解半纤维素为单糖或单糖衍生物。此外,还有蜗牛酶,主要用于花粉母细胞和四分体细胞。
ZA3~867纤维酶是上海植物生理研究所从野生型绿色木霉同各菌种中提取制成的,粗制品是多种酶的复合物,含有纤维素酶(包括C1、CX、B一葡萄糖苷酶等),果胶质,半纤维素酶等,分离细胞壁的效果较好。这种复合酶使用时不需加半纤维素酶和果胶酶等,就可以分离出植物原生质体。
日本产的Onozuka纤维素酶常和果胶酶结合使用,可先用果胶酶降解果胶,使分开细胞,再用纤维素酶处理降解细胞壁。即二步法降解。
2.渗透稳定剂
植物细胞壁对细胞有良好的保护作用。去除细胞壁之后如果溶液中的渗透压和细胞内的渗透压不同,原生质体有可能涨破或收缩。因此在酶液、洗液和培养液中渗透压应大致和原生质体内的相同,或者比细胞内渗透压略大些。渗透压大些有利于原生质体的稳定,但也有可能阻碍原生质体的分裂。
因此,在分离原生质体的酶溶液内,需加入一定量的渗透稳定剂,其作用是保持原生质体膜的稳定,避免破裂。常用的两种系统为:①糖溶液系统:包括甘露醇、山梨醇、蔗糖和葡萄糖等,浓度约在0.40~0.80mol/L。本系统还可促进分离的原生质体再生细胞壁并继续分裂;②盐溶液系统:包括 KCL、MgSO4和 KH2PO4等。其优点是获得的原生质体不受生理状态的影响,因而材料不必在严格的控制条件下栽培,不受植株年龄的影响,使某些酶有较大的活性使原生质体稳定。另外,添加牛血清蛋白可减少或防止降解壁过程中对细胞器的破坏。近年来多采用在盐溶液内进行原生质体分离,然后再用糖溶液作渗透稳定剂的培养基中培养。
此外,酶溶液里还可加入适量的葡聚糖硫酸钾,它可提高原生质体的稳定性。这种物质可使RNA酶不活化,并使离子稳定。
3.酶溶液的pH值
酶溶液的pH值对原生质体的产量和生活力影响很大。用菜豆叶片作培养材料时,发现原始pH值为5.0时,原生质体产生一得很快,但损坏较严重,并且培养后大量破裂。当PH值提高到6.0时,最初原生质体却产生少,但与pH值为5.0时处理同样时间后相比,原生质体数量显著增加。原始pH值提高到7.0时生活的原生质体数量进一步增加,损伤的原生质体也少得多。
三、原生质体的分离
分离原生质体时,首先要让酶制剂大量地吸附到细胞壁的纤维素上去,因此,一般先将材料分离成单细胞,然后分解细胞壁。采用将酶液减压渗入组织,或将组织切成薄片等方法,都可增加酶液与纤维素分子接触的机会。
酶处理目前常用的多是“一步法”,即把一定量的纤维素酶,果胶酶和半纤维素酶组成混合酶溶液,材料在其中处理一次即可得到分离的原生质体。
植物材料须按比例和酶液混合才能有效地游离原生质体,一般去表皮的叶片需酶量较少,而悬浮细胞则用酶量较大。每克材料用酶液10~30ml不等。
由于不同材料的生理特点不同,在研究游离条件时,必须试验不同渗透压浓度的细胞,找出适宜的渗透浓度。例如,游离小麦是浮细胞的原生质体的酶液中须加入0.55mol/L甘露醇,游离水稻悬浮细胞的原生质体的酶液中只加 0.4~0.45mol/L的甘露醇,两者差别较大。
酶解处理时把灭菌的叶片或子叶等材料下表皮撕掉,将去表皮的一面朝下放入酶液中。去表皮的方法是:在无菌条件下将叶面晾干、顺叶脉轻轻撕下表皮。如果去表皮很困难,也可直接将材料切成小细条,放入酶液中。
对于悬浮细胞等材料,如果细胞团的大小很不均一,在酶解前最好先用尼龙网筛过滤一次,将原细胞团去掉,留下较均匀的小细胞团时再进行酶解。
酶解处理一般地在黑暗中静止进行,在处理过程中偶尔轻轻摇晃几下。对于悬浮细胞,愈伤组织等难游离原生质体的材料,可置于摇床上,低速振荡以促进酶解。酶解时间几小时至几十小时不等、以原生质体游离下来为准。但是,时间过长对原生质体有害,所以一般不应超过24h。酶解温度要从原生质体和酶的活性两方面考虑。对于这几种酶来说,最佳处理温度在40~50℃,但这个温度对植物细胞来说太高,所以一般都在25℃ 左右进行酶解。
若用叶片作为材料,取已展开的生活叶片,用0.53%次氨酸钠和70%酒精进行表面灭菌,然后切成2cm见方。把 4g叶组织置于含有 200ml不加蔗糖和琼脂的培养基 500ml三角瓶中。在 4℃黑暗条件下培养16~24h,以后叶片转入含有纤维素酶、果胶酶、无机盐和缓冲液的混合液中,pH值为5.6,通常在酶液中使用的等渗剂为0.55~0.6mol甘露醇。然后,酶液真空渗入叶片组织。在28℃条件下,每分钟40转的旋转式转床上培养4h后,叶片组织可完全分离。
若用悬浮培养细胞,可不经过果胶酶处理,因为悬浮细胞液主要由单细胞和小细胞团组成。取悬浮细胞放入10ml的酶液中(3%纤维素酶,14%蔗糖,pH值5.0~6.0),在25~33℃条件下酶解24h。原生质体一酶混合液用30um的尼龙网过滤,通过低速离心收集原生质体。
四、影响原生质体分离的因素
1.酶制剂活力和纯度
粗制的商品酶含有核酸酶和蛋白酶等杂质,它们对原生质体的活力是有害的。因此,在使用之前须将这些酶纯化,一般利用凝胶柱使酶制剂脱盐纯化。酶的活性还与pH值有关。Onoznka纤维素酶R-10和离析酶R一10的最适宜pH值分别为5~6和4~5。不过实际上酶溶液的pH值经常调节4.7~6.0之间。
2.渗透稳定剂的作用
在分离原生质体时,渗透稳定剂有保护原生质体结构及其活力的作用。糖溶液系统可使分离的原生质体能再生细胞壁,并使之能继续分裂,其缺点是有抑制某些多糖降解酶的作用。盐溶液系作渗透稳定剂时对材料要求较严格,且使原生质体稳定,使某些酶有较大活性。但是易使原生质体形成假壁,同时使分裂后细胞是分散的。
五、原生质体的净化和活力测定
在分离的原生质体中,常常混杂有亚细胞碎片,维管束成分,未解离细胞,破碎的原生质体以及微生物等。这些混杂物的存在会对原生质体产生不良影响。此外,还需去掉酶溶液。以净化原生质体。
原生质体纯化常用过滤和离心相结合的方法,步骤大致如下:
1.将原生质体混合液经筛孔大小为40-100um的滤网过滤,以除去未消化的细胞团块和筛管、导管等杂质,收集滤液。
2.将收集到的滤液离心,转速以将原生质体沉淀而碎片等仍悬浮在上清液中为准,一般以500r/min离心15min。用吸管谨慎地吸会上清液。
3.将离心下来的原生质体重新悬浮在洗液中(除不含酶外,其他成分和酶液相同),再次离心,去上清液,如此重复三次。
4.用培养基清洗一次,最后用培养基将原生质调到一定密度进行培养。一般原生质体的培养密度为104~106/ml。
在原生质体培养前,常常先对原生质体的活性进行检测。测定原生质体活性有多种方法,如观察胞质环流、活性染料染色、荧光素双醋酸酯(FDA)染色等。这些方法各有特点,但现在一般用的是FDA染色法。FDA本身无荧光,无极性,可透过完整的原生质体膜。一旦进入原生质体后,由于受到脂酶分解而产生有荧光的极性物质荧光素。它不能自由出太原生质体膜,因此有活力的细胞便产生荣光,而无活力的原生质体不能分解FDA,因此无荧光产生。FDA染色测活性的方法如下:
取洗涤过的原生质体悬浮液 0.5ml,置于10×100mm的小试管中,加入 FDA溶液使其最终浓度为 0.01%,混匀、置于室温5min后用荧光显微镜观察。激发光滤光片用QB24,压制滤光片用JB8。发绿色荧光的原生质体为有活力的,不产生荣光的为无活力的。由于叶绿素的关系,叶肉原生质发黄绿色荧光的为有活力的,发红色荧光的为无活力的。
吃罐头没刀——难开口;口难开;不好开口 。
吃过黄连喝蜜糖——苦尽甜来
吃海水长大的——管得宽
吃黄瓜蘸雪——乏味
吃鸡蛋不拿钱——混蛋
吃饺子不吃馅——调(挑)皮
吃酒陪新娘——装模作样;装样子 。
吃烤山芋——又吹又拍;吹吹拍拍 。
吃亏全在大意——末日来临
吃辣椒屙不下——两头受罪
吃狼奶长大的——凶恶极了
吃凉粉发抖——凉透心;冷透心 。
吃了白糖吃冰糖——乏味
吃了豹子胆——胆子不小;胆子大 。
吃了抄手吃馄饨——一码事
吃了秤秆——一肚子心眼
吃了定心丸——做事踏实
吃了海椒啃甘蔗——嘴甜心辣
吃了鸡下巴——爱搭嘴
吃了枯炭——黑心;黑了心
吃了雷公的胆——天不怕地不怕 。
吃了灵芝草——长生不老
吃了煤炭——火气冲天
吃了蒙汗药——动弹不得
吃了鸟枪药——火气冲天
吃了砒霜的老母鸡——抬不起头来 。
吃了三天斋就想上西天——功底还浅 。
吃了三碗红豆饭——满肚子相思 。
吃了烧茄子——多心
吃了窝脖鸡——憋气
吃了喜鹊蛋——乐开怀
吃了一包回形针——一肚子委屈(曲)
吃了一肚子响雷——胆大包天
吃了一筐烂石榴——满肚子坏点子 。
吃了一筐烂杏——心酸得很
吃了鱼钩的牛打架——勾心斗角 。
吃了早饭睡午觉——乱了时辰
吃了猪肝想猪心——贪得无厌;贪心不足 。
吃麻油唱曲子——油腔滑调
吃米不记种田人——忘本
吃棉花长大的——心软
吃面条找头子——多余
吃内脏的虫子——心腹之患
吃人不吐骨头——心狠手辣
吃人的老虎拍照——恶相;恶模样 。
吃人饭拉狗屎——没有人味;没人味 。
吃桑叶吐丝——肚里有货
吃虱子留后腿——小气
吃石头拉硬屎——顽固不化
吃屎狗难断吃屎路——本性难移 。
吃水不记掘井人——忘本
吃天鹅肉——痴心妄想;妄想
吃歪藤长大的——乱纠缠
吃苇坯拉炕席——满肚子瞎编;肚里编;嘴能编 。
吃窝头就辣椒——图爽快
吃乌龟皮——装王八孙子
吃稀糊糊游西湖——穷开心
吃咸鱼蘸酱——多余
吃香蕉剥皮——吃里爬(扒)外 。
吃药用冰糖作引子——又苦又甜 。
吃鱼不吐骨头——说话带刺儿
吃枣子不吐核——囫囵吞
吃斋的恶婆子——口素心不善
吃猪肉念佛经——冒充善人
吃竹竿长大的——直性人;直性子,
吃着海椒训人——说话带辣味
吃着黄连唱着歌——以苦为乐
吃着鸡,抓着鸭——贪得无厌;贪心不足 。
吃着梅子问酸甜——明知故问
吃着油条唱歌——油腔滑调
痴情碰冷遇——伤透心肝;伤透心;伤心 。
池里的王八塘里的鳖——一路货 。
池塘里的荷花——出污泥而不染 。
池塘里的荷叶——随风摆
池塘里的泥鳅——翻不起大浪
池塘里摸菩萨——劳(捞)神
赤膊上阵——要大干了
赤脚的和尚——两头光
冲瞎子问路——方向不明;找错了人 。
冲着和尚骂秃子——寻着惹气
冲着柳树要枣吃——故意刁难;有意为难 。
冲着姨夫叫丈人——乱认亲
虫吃沙梨——心里肯(啃)
虫蛀的扁担——经不住两头压
虫蛀的老槐树——肚里空;腹内空空 。
虫蛀的苹果——放到哪,烂到哪 。
虫子钻进核桃里——假充好人(仁);冒充好人(仁)
抽刀断水——汪费心机
抽了架的丝瓜——蔫了
抽了筋的老虎——塌了架
抽芽的蒜头——多心
抽烟不带火——沾光
抽烟烧枕头——怨不着别人
仇人打擂——有你无我
绸子布包狗屎——臭名在外
丑八怪搽胭脂——自以为美
臭虫爬到拜盒里——抓住理(礼)了 。
臭虫咬胖子——揩油;沾油水
臭豆腐下油锅——有点香
臭鸡蛋——甩了
臭水坑里的核桃——不是好人(仁)
臭蚊子——死叮
臭羊皮——不消(硝)
出东门,往西拐——糊涂东西
出洞的狐狸——贼头贼脑
出洞的老鼠——东张西望
出锅的大虾——卑躬(背弓)屈膝 。
出国的大轮船——外行(航)
出家人娶媳妇——不守规矩
出嫁的姑娘——有主
出了笼的黄雀——自由自在
出了土的笋子——冒尖;露头
出了窑的砖——定了型;定型了 。
出笼的馍馍烤着吃——欠火候
出炉的钢锭——定了型;定型了 。
出炉的红铁——找打
出炉的铁水——沾不得
出门带条狗——随人走
出门戴口罩——嘴上一套
出门两条腿——随人走
出门坐飞机——远走高飞
出山的猛虎——凶相毕露;势不可当 。
出水的芙蓉——一尘不染
出膛的子弹——不会拐弯;永不回头;决不回头 。
出头的钉子——先挨砸
出土的陶俑——总算有了出头之日 。
出土的竹笋——捂不住
出土文物——宝贝疙瘩;老古董 。
出污水沟又掉茅坑——倒霉透了;真倒霉 。
出衙门骂大街——没事找事
初八当重阳——不久(九)
初二三的月亮——不明不白
初睛露太阳——重见天日;开云见日 。
初生的牛犊——不怕虎
初生的娃娃——小手小脚
初一晚上走路——漆黑一片
初一夜里出门——处处不明
除夕夜守岁——送旧迎新
厨房里的馋猫——记吃不记打
厨房里的垃圾——鸡毛蒜皮
厨师熬粥——难不住
厨子搬家——另起炉灶
厨子剥葱——扯皮
厨子回家——不跟你吵(炒)了 。
锄头钩月亮——够不着
锄头刨黄连——挖苦
楚霸王举鼎——好大的力气
楚霸王困垓下——四面楚歌
楚霸王种蒜——栽到家了
楚霸王自刎——身败名裂
楚霸王自刎乌江——没脸回江东 。
楚汉相争——在谋不在勇
楚王拿晏子开心——辱人反被辱 。
楚庄王猜谜语——一鸣惊人
楚庄王理政——一鸣惊人
揣着明白说糊涂——装傻
穿背心戴棉帽——不相称
穿不破的鞋——底子好
穿草鞋上树——欠妥(拖)
穿的兔儿鞋——跑的倒快
穿钉鞋踩屋瓦——捅漏子
穿钉鞋拄拐棍——步步扎实
穿冬衣摇夏扇——不知冷热
穿革鞋戴礼帽——土洋结合
穿汗衫戴棉帽——不知春秋
穿紧身马褂长大的——贴心
穿没底鞋——脚踏实地
穿木履过摩天岭——走险
穿皮袄吃醪糟——周身人热
穿皮袄打赤脚——凉了半截
穿山甲拱泰山——攻不倒
穿蓑衣救火——迟早都要烧
穿兔子鞋的——跑得快
穿袜子没底——装面子
穿西装戴斗笠——土洋结合
穿新鞋走老路——因循守旧
穿着汗衫戴礼帽——不相称
传闲话,落不是——自讨没趣;自找没趣;无事生非 。
船舱里生小鸡——漂浮(孵)
船到江心才补漏——晚了;迟了 。
船到码头车到站——停止不前
船底下放鞭炮——闷声闷气;闷声不响 。
船后跟朝北——难(南)行
船开才买票——错过时机
船老大带徒弟——从何(河)说起 。
船老大敬神——为何(河)
船老大坐后艄——看风使舵
船上打伞——没天没地
船上开晚会——载歌载舞
船上人充油灰——慢慢来
船上人上岸——不(步)行
船上失火——有底
船头办酒席——难铺开
船脱离了水——行不通;走不通 。
疮口上贴膏药——揭不得
窗户上糊纸——一捅就破
窗户上走人——门外汉
窗户眼里看人——小瞧
窗口插桂花——里外香
窗台上种瓜——长不大
窗子小跳不进去——格格不入
床底下吹号——低声下气
床底下吹喇叭——低声下气
床底下堆宝塔——高也有限
床底下放风筝——飞不高
床底下关鸡——提醒你
床底下鞠躬——抬不起头来
床底下练武——施展不开
床底下抡大斧——不好使家伙
床底下支张弓——暗箭伤人
床上耍花枪——打不开场面
吹灯裹脚——瞎缠
吹灯讲故事——瞎说
吹灯捉虱子——瞎摸
吹鼓手办喜事——自吹
吹鼓手的肚子——气鼓气胀;气鼓鼓 。
吹鼓手分家——一人一把号
吹鼓手赶集——没事找事
吹鼓手叫阵——赛吹
吹鼓手跳舞——蹦着吹
吹火筒不通——赌(堵)气
吹火筒打鸟——不像腔(枪);不是真腔(枪)
吹糠见米——本小利大
吹牛皮赚钱——无本生意
吹气灭火——口气不小
吹唢呐的腮帮子——胀起来了
吹糖人出身——口气挺大
吹糖人的改行——不想做人
锤子炒菜——砸锅
春蚕到死——怀着私(丝)
春草闹堂——急中生智
春茶尖儿——又鲜又嫩
春分得雨——正逢时
春天的柳树枝——落地生根
春天的萝卜——心虚
春天的毛毛雨——贵如油
春天的蜜蜂——闲不住
春天的树尖——一天变个样
春天河边——富有诗(湿)意
春夏秋冬——年年有
椿树上的虱子——懒相(象)
瓷公鸡,玻璃猫——一毛不拔
瓷盘里的珍珠——明摆着
辞去先生去做贼——不务正业;不于正经事 。
刺笆(荆棘〕林里的斑鸠——不知春秋 。
刺笆林中的苦蒿——没人睬(采)
刺拐棒弹棉花——越整越乱
刺猬的脑袋——不是好剃的头
刺猬发怒——炸毛了
刺猬皮包钢针——里外扎手
刺猬在巴掌上打滚——碰到棘手事;棘手 。
从河南到湖南——难(南)上加难(南)
从火坑里爬出来的好汉——死里求生 。
从楼上摔下一筐子鸡蛋——没有一个好的;没有一个好货 。
从污水缸跳到粪池里——越搞越臭 。
从小娇惯的公主——随心所欲
从斜门里看人——怎么看怎么歪 。
从盐店里闹出来的伙计——闲(咸)得发慌 。
粗石头性子——一碰就发火
醋厂里冒烟——酸气冲天
醋泡辣椒——又酸又辣
醋瓶子打飞机——酸气冲天
醋坛子打酒——满不在乎(壶)
醋坛子里泡胡椒——尝尽辛酸
崔鸯鸯送张生——一片伤心说不清 。
淬过火的钢条——宁折不弯
错把洋芋当天麻——不知好歹;好歹不分 。
错公穿了错婆鞋——错上加错
搭梯子上天——走投无路
妲己的子孙赴宴——露了尾巴;现了原形 。
打败的鹌鹑斗败的鸡——上不了阵势 。
打败的士兵——垂头丧气
打抱不平的说理——仗义执言
打柴的下山——担心(薪)
打醋的进当铺——走错了门;找错了门 。
打灯笼赶嫁妆——两头忙
打电报买车票——急上加急
打掉牙往肚里吞——忍气吞声
打发闺女娶媳妇——两头忙
打翻了的田鸡笼——一团糟
打更人睡觉——做事不当事
打花脸照镜子——自己吓唬自己 。
打坏了的玻璃瓶——废物
打架揪胡子——谦虚(牵须)
打酒只问提壶人——错不了
打开棺材喊捉贼——冤枉死人
打开闸门的水——滚滚向前
打烂锅头——没得主(煮)
打了盘子对碗沿——不对碴
打了兔子喂鹰——好处给了恶人 。
打锣找孩子——丢人打家伙
打鸟瞄得准——一目了然
打破脑壳充硬汉——活受罪
打破嘴巴骂大街——血口喷人
打起脸来演戏——粉墨登场
打枪不瞄准——无的放矢
打伞披雨衣——多此一举
打蛇打到七寸上——恰到好处
打手击掌——一言为定
打水不关水龙头——放任自流;任其自流 。
打死儿子招女婿——图新鲜
打疼了疯狗——反咬一口
打铁不用锤——硬充能耐
打铁的拆炉子——散伙(火)
打铁卖粮——各干一行
打兔子捉到黄羊——格外好;捞外块 。
打下去的桩头——定了
打一巴掌揉三揉——假仁假义;虚情假意 。
打油钱不买醋——专款专用
打鱼卖钱抽大烟——水里来,火里去 。
打鱼人回家——不在乎(湖)
打掌的敲耳朵——离题(蹄)太远 。
打肿脸充胖子——不懂装懂
打准腰部才罢休——正中下怀
打着公鸡生蛋——强人所难
打着手电筒走夜路——前途光明 。
打着兔子跑了马——得不偿失
打字机上的字盘——横竖不成话 。
大白公鸡下花花蛋——离奇;太离奇 。
大白天打劫——明目张胆
大白天遇见阎王爷——活见鬼
大便带出个擀面杖——恶(屙)棍 。
大虫打哈哈——笑面虎
大虫头,长虫尾——虎头蛇尾
大刀斩小鸡——小题大作
大肚子罗汉写文章——肚里有货 。
大粪车出村——装死(屎)
大风吹倒帅字旗——出师不利
大风吹翻麦草垛——乱糟糟
大风地里点灯——难看
大风天吃炒面——难开口;口难开;不好开口 。
大风天的油灯——吹了
大夫摆手——没治了
大缸里放针——粗中有细
大缸里模鱼——没跑;跑不了
大个子盖小人被——顾头不顾脚 。
大个子站在矮檐下——抬不起头来 。
大姑娘拜天地——头一回;头一遭 。
大姑娘抱孩子——人家的;帮忙的 。
大姑娘当媒人——先人后己;自顾不暇;有嘴讲别人,无嘴说自己 。
大姑娘的长辫子——往后甩;甩在脑后了 。
大姑娘的脊粱——女流之辈(背)
大姑娘的心事——摸不透
大姑娘讨饭——死心眼;拉不开脸面 。
大姑娘想婆家——难开口;口难开;不好开口 。
大姑娘绣花——细功夫;九曲十八弯 。
大姑娘绣嫁衣——穿针引线;细功夫 。
大姑娘养孩子——费力不讨好;吃力不讨好;费劲不落好 。
大姑娘掌钥匙——有职无权;当家不做主 。
大姑娘坐花娇——迟早一回;迟早有一次 。
大观园里的闺秀——四体不勤,五谷不分 。
大管子套小管子——不对口径
大闺女的围巾——绕脖子
大闺女买假发——随便(辫)
大闺女盼郎——朝思暮想
大海大洋里的小舟——不着边际 。
大海的潮水——时起时落
大海翻了豆腐船——水里来,水里去 。
大海里捕鱼,深山里打猎——各吃一方 。
大海里的浮萍——没着落
大海里的浪涛——波澜壮阔
大海里的沙粒——数不清
大海里的水——到哪里哪里嫌(咸);到哪哪嫌(咸)
大海里丢针——没处寻;难寻
大海里吐唾沫——不显眼
大海里下竿子——不知深浅
大河边上的望江亭——近水楼台 。
大河里淌下卧单来——刘(流)备(被)
大河里洗手——干干净净
大河里一泡尿——显不着
大河漂油花——一星半点
大胡子——难题(剃)
大火报警——一鸣惊人
大伙都唱一个调——异口同声
大鸡不吃碎米——看不上眼
大家看电影——有目共睹
大江边的小雀——见过风浪
大江里的水泡——渺小
大江里一泡尿——有你不多,无你不少 。
大将军骑马——威风凛凛
大脚穿小鞋——难受;钱(前)紧;迈步难;硬撑;死撑;难进 。
大街得信小街传——道听途说
大街上卖笛子——自吹
大街上生私孩子——当众出丑
大卡车开进小巷子——难转弯;转不过弯来 。
大口啃住包子馅——抓重点
大老粗看佛经——茫然不懂
大理石做门匾——牌子硬
大力士背碾盘——好大的力气
大力士耍扁担——轻而易举
大力士绣花——力不能及;力不从心;心有余而力不足;不对劲 。
大梁柁做文明棍儿——大材小用 。
大龙不吃小干鱼——看不上眼
大路旁的小草——有你不多,无你不少 。
大路上的电杆——靠边站
大路上的砖头——绊脚石
大路上载葱——白费功夫;白费劲;枉费工 。
大轮船靠小港——挨不上
大轮船下锚——稳稳当当
大麻籽喂牲口——不是好料
大麦芽做饴糖——好料子
大门口的春联——年年有
大门口吊马桶——臭名在外
大门上插秧——有门道(稻)
大门上的对联——一对红
大门上挂扫把——臊(扫)脸
大米的弟弟——小米
大眠起来的春蚕——满肚子私(丝)
大拇指卷煎饼吃——自吃自;自咬自 。
大拇指头抠耳朵——进不去
大年初一拜年——你好我也好;彼此彼此;彼此一样 。
大年初一吃面条——移风易俗
大年初一吃窝头——不香
大年初一串门——见人就作揖
大年初一的袍子——借不得
大年初一翻皇历——头一回;头一遭 。
大年初一见了面——尽说好话
大年初一看历书——日子长哩
大年初一没月亮——年年都一样 。
大年三十的案板——家家忙
大年三十的烟火——万紫千红
大年三十看皇历——没期啦;没日子啦 。
大年三十晚上熬稀粥——年关难过 。
大年五更出月亮——头一回;头一遭 。
大胖子穿小褂——不合身
大胖子骑瘦驴——不相称
大胖子跳井——深不下去;不深入 。
大胖子跳橡皮筋——软功夫
大胖子推磨——杜撰(肚转)
大胖子下山——连滚带爬
大胖子学游泳——浮力大
大胖子作前滚翻——滚球
大炮打群狼——一哄(轰)而散 。
大炮的性子——爱轰
大炮轰苍蝇——不够本钱;不够本;不上算;大材小用;白费功夫 。
大炮上刺刀——远近全能对付
大炮筒子——不转向;不会拐弯 。
大巧背小巧——巧上加巧
大热天吃炒豆——干脆;干干脆脆 。
大人不记小人过——宽宏大量
大舌头读报——含糊其辞;含含糊糊 。
大师傅打蛋——各个击破
大石板上青苔毛——长不了
大石板压蛤蟆——鼓不起劲来
大石沉海——一落千丈
大石头压死蟹——以势压人
大树底下晒太阳——阴阳不分
大树上吊个口袋——装疯(风)
大水冲了龙王庙——一家人不认一家人 。
大水冲了菩萨——绝妙(庙)
大水缸里捞芝麻——难找
大蒜剥皮——层层深入
大蒜调冻豆腐——难办(拌)
大蒜发芽——多心
大铁锤敲铜锣——响当当;当当响 。
大厅中央挂字画——堂堂正正
大头鱼(鳕鱼)背鞍子——跑江湖 。
大头针包饺子——扎心
大腿上挂篷帆——一路顺风
大腿上贴门神——走了神
大腿上贴商标——走到哪宣传到哪 。
大碗盖小碗——管得拢
大网捕小鱼——劳而无功;有劳无功 。
大雾天放鸭子——有去无回
大雾天看山峰——渺茫
大瞎子看告示——装模做样
大象逮老鼠——有劲使不上;有力无处使 。
大象的鼻子——能曲能伸
大象的屁股——推不动
大象呼吸——双管齐下
大象口里拔牙——难办
大象抓凤凰——眼高手低
大象走路——稳稳当当;稳当当的 。
大象嘴里拔牙——胆子不小;胆子大;难办;好大胆;好大的胆子 。
大雪落在大海里——看得见,摸不着 。
大烟鬼的牙——黑啦
大烟鬼拉车——有气无力;少气无力 。
大眼瞪小眼——面面相觑
大眼贼碰上仓老鼠——大眼瞪小眼 。
大雁吃莲秆——直脖啦
大雁东南飞——趾高气扬
大雁跟着飞机跑——落后
大爷和太爷——只差一点;差一点 。
大阴天吃凉粉——不看天气
大鱼嘴边的虾子——跑不了
大丈夫有肚量——能屈能伸
大轴里套小轴——话(画)里有话(画)
大字丢了横——冒充人;装人样 。
大嘴乌鸦吃食——一副贪相
呆女嫁痴汉——谁也不嫌谁
呆子把脉——摸不着
呆子吃盖杯——四下无门
呆子哼曲子——没谱
呆子看戏——光图热闹
呆子求情——有理说不清;讲不清道理 。
代别人写情书——不是真心
带了秤杆忘了砣——丢三拉四
带着秤杆买小菜——斤斤计较
带着碗赶现成饭——白吃
逮了兔子死了鹰——得不偿失
戴草帽亲嘴——差一截子;差一大截;对不上口 。
戴穿了的帽子——出头了
戴大红花回朝——大功告成
戴斗笠坐席子——独霸一方
戴钢盔登脚手架——硬着头皮上 。
戴钢盔爬树——硬着头皮上
戴礼帽的偷书——明白人办糊涂事 。
戴上笼头的小毛驴——听人使唤 。
戴着帽子找帽子——糊涂到顶了 。
戴着面罩做人——其貌不扬
戴着墨镜倒骑驴——尽走黑道
戴着眼镜买车轴——各对其眼
黛玉焚稿——忍痛割爱
单箭射双雕——一举两得
单枪匹马上阵——孤胆英雄
单身汉跑江湖——无牵挂;无牵无挂 。
单身汉碰到和尚——尽光棍;全是光棍 。
单眼看花——一目了然;白费功夫;白费劲;枉费工 。
单眼挑媳妇——一眼看中
担心手臂比腿粗——多作
担雪填深井——误人不浅;白费功夫;枉费工 。
担着苦瓜乐本——没谱儿了
胆小鬼当兵——上不了阵
胆小鬼的眼睛——见啥怕啥;见什么都怕 。
胆小鬼走夜路——提心吊胆
胆汁滴在眉毛上——眼前苦;苦在眼前 。
弹弓打飞机——差得远;差远了;挨不上 。
蛋打鸡飞——两头空
当兵的背算盘——找仗(帐)打 。
当兵的垒灶——安营扎寨
当官不坐高板凳——平起平坐
当官的拍桌子——惊堂
当和尚不撞钟——白吃
当了皇帝想成仙——贪得无厌
当面锣,对面鼓——明打明敲
当铺里卖孩子——贱人
当天和尚撞天钟——得过且过
当衣服买酒喝——顾嘴不顾身
当着阎王靠判宫——没有好下场 。
挡风玻璃做锅盖——明受气
刀把老鼠——刁
刀尖上走路——玄乎
刀口遇滚水烫——疼痛难忍
刀劈毛竹——迎刃而解;干脆利索;干净利索;一分为二 。
刀切大葱——两头空
刀刃上抹鼻涕——难下手;下不了手;无法下手 。
刀剜黄连木——刻苦
刀下的绵羊——任人宰割;随人宰割 。
刀子切元宵——不愿(圆)
刀子上打滚——身子硬
刀子嘴,豆腐心——嘴硬心软
倒背手看鸡窝——不简单(拣蛋)
倒吊的腊鸭——一嘴油
倒粪倒出耙齿——又臭又硬;臭硬 。
倒糠拍箩——一点不留
倒了油瓶不扶——袖手旁观;懒到家了 。
倒骑毛炉——往后瞧
倒瓤的冬瓜——一肚子坏水
倒爷发家——不义之财
捣蒜剥葱——各管一工
捣蒜槌子打鼓——懂(冬)
到火神庙求雨——找错了门
到了黄山想泰山——这山望着那山高 。
到了火车站——鬼(轨)多
到了山顶想上天——贪得无厌
道士吹螺号——吓鬼
道士舞大钳——少见(剑)
道士遭雷打——作法自毙
道士捉妖——有福(符)
稻草包黄鳝——溜啦
稻草肚子棉花心——虚透了
稻草秆打人——软弱无力
稻草灰——随人捏
稻草人放火——-害人先害已
稻草绳子拔河——经不住拉
稻秆敲锣——不响
稻田里的稗子——你算哪棵苗
稻田里拉犁耙——拖泥带水
稻子去了皮——白人(仁)儿
得病不吃药——熬
得阑尾动手术——除恶务尽
得陇望蜀——贪得无厌;贪心不足 。
得牛还马——礼尚往来
得鱼丢钩——忘恩负义
灯草撑屋梁——做不了主(柱)
灯草打老牛——无关痛痒;不痛不痒 。
灯草抵门——靠不住;不可靠
灯草灰过大秤——没分量
灯草灰咽肚里——说话没分量
灯草剖肚——开心
灯草烧灰——飘飘然
灯草织布——枉费心机
灯草做火把——一亮而尽
灯蛾扑火——惹火烧身;引火烧身;自焚 。
灯笼点蜡烛——心里亮;肚里明 。
灯笼救火——自焚
灯笼救人——自焚
灯笼做枕头——承受不起;难撑。
灯谜晚会——耐人寻味
灯下点烛——白费蜡
灯芯草挑刺——太软
灯盏添油——不变心
灯盏无油——光费心(芯)
登上泰山想升天——好高骛远
登太行望运河——远水不解近渴 。
蹬着刀尖进虎口——步步危险
蹬着耗子当成牛——吹的
蹬着梯子上天——没门儿
等公鸡下蛋——没指望
凳子比桌子还高——没大没小
凳子上抹石灰——白挨
瞪着眼吹死猪——长吁短叹
低头狗——暗下口
笛子吹火——到处泄气
地府里屙屎——懒鬼
地瓜地里种豆角——纠缠不清
地瓜冒热气——熟透了
地窖里聊天——说黑话
地里的庄稼苗——顺风倒
地上的蚂蚁——数不清
地上的野草——除不尽
地上的影子——你走他也走
地上栽电杆——正直
地主老爷的碗——难端
弟兄俩分家——单干;另起妒灶 。
点火的爆竹——一肚子气
点火上轿——照价(嫁)
点了黄豆不出苗——孬种;不是好种 。
点名不到——没出席
电灯泡上点香烟——其实不然(燃)
电灯照雪——明明白白;明白
电风扇的脑袋——专吹冷风
电话断了线——说不通
电话局的话务员——耳听八方
电线杆当套马杆——用材不当
电线杆顶上雕花——手艺高
电线杆上插土豆——大小是个头 。
电线杆上挂邮箱——高兴(信)
电线杆上拉胡琴——大老粗
电线杆上晒衣服——好大的架子 。
电线杆做牙签——进不了口
电线上的风筝——缠上了
电影里放电视——戏中有戏
电子显微镜——明察秋毫
店铺里的蚊子——吃客
垫着被盖睡觉——高枕无忧
叼着鲜花放屁——美不遮丑
貂蝉嫁吕布——英雄难过美人关 。
碉堡里伸机枪——伺机伤人
雕花师傅戴眼镜——精雕细刻
吊骆驼上楼——费力不讨好
吊起的冬瓜——头重脚轻
吊扇下面拉家常——讲风凉话
吊死鬼打花脸——色鬼
吊死鬼瞪眼——死不瞑目
吊死鬼照镜子——自己吓唬自己
在基本会用的情况下需要注意:1.防止压碎标本:即调焦时先从侧面观察用粗螺旋上升载物台,使标本与物镜(低倍镜)间的距离在2毫米内,再从目镜中观察慢慢下降载物台直到初见物像,该用细螺旋做精细调焦即可。
2.低倍镜聚焦好后,可直接将高倍镜旋入光路并略微用细调焦聚焦即可观察。
3.用高倍镜观察液体标本时一定要加盖玻片,以防液体浸入物镜,污染、腐蚀物镜,影响清晰度。
4.观察无色标本时应将聚光镜的光圈关小以增加明暗对比度会获得较高的观察效果。
5.需要用油镜观察时,先给标本上滴一滴镜油从侧面观察将载物台上升至油镜完全浸入标本上的镜油中,然后用细螺旋缓慢下降载物台至图像清晰。
6.每次用完油镜后应及时用镜纸擦净镜油。以防镜油干涸,影响观察。
7.每次用完显微镜后,应将其载物台降至最低,以防镜台下滑。
可以考虑采用红外光谱、透射电子显微镜和光电子能谱等分析手段考察表面修饰纳米粒子的结构和分散性能.。
补充
TiO2 纳米粒子的表面修饰研究。
1 实验
① 试剂
所用试剂油酸(OA) 、正己烷等均为分析纯试剂 ,使用前未经进一步处理 , TiO2 为 P225 ,平均粒径为 20 nm ,购自德国Degussa 公司.。
②仪器
采用 PE22000 FT2IR 红外光谱仪表征纳米粒子的表面键合结构 ;采用 Hitachi H2800 透射电子显微镜(TEM) 分析纳米粒子的形貌 ,加速电压为 200 kV ;纳米粒子表面状态分析是。
在 PHI25300 ESCA 能谱仪上进行的 ,采用 Al 阳极靶 ,功率为250 W。
③TiO2 纳米粒子表面修饰过程。
向正己烷溶剂中加入一定量的油酸和纳米 TiO2 ,超声振荡 ,纳米 TiO2 悬浮于正己烷中. 在超声波加热器中 ,60 ℃超声反应 4 h. 将所得产物分离 ,洗涤 ,晾干 ,并在真空干燥器中。
30 ℃恒温干燥 24 h ,得到了白色粉末 ,即为油酸修饰的 TiO2纳米粒子. 在相同的实验条件下 ,改变反应物中油酸和 TiO2纳米粒子的比例 ,油酸/ TiO2(摩尔比 ,1 摩尔 TiO2 为 6102×1023个 TiO2 分子) 分别为 A : 0 , B : 012 , C : 014 , D : 018 时 ,可得到一系列表面覆盖量不同的产物.。
2 结果与讨论
① 红外光谱研究表面修饰基团
图 1 为 TiO2 纳米粒子以及油酸修饰纳米粒子的红外光谱图. 由图可见 ,在图 1 (c) 和(d) 中均存在长链烷基的特征峰 ,其特征频率为 2930 , 2850 cm- 1;在 1540 , 1410 cm- 1处出。
现的峰是羧酸酯 ( —COOTi —) 的特征峰 ,这表明油酸和 TiO2纳米粒子表面活性较高的羟基发生了类似酸和醇生成酯的反应. 从图 1 (a) ~(d) 中均可观察到 3430 cm- 1左右的醇羟基峰 ,这是纳米粒子表面 OH 的特征峰 ,说明 TiO2 纳米粒子表。
面的羟基并没有完全反应. 其反应过程可描述如下 :。
TiO2(OH) n + yHOOCC17H33。
TiO2(OH) n - y(OOCC17H33) y + yH2O。
在图 1 (b) 中长链烷烃和羧酸盐的特征峰很弱 ,而在图 1(c) 和(d) 中它们的特征峰则比较明显 ,并且各基团的特征峰在(c) 和(d) 中强度大致相等. 说明在该反应体系中 ,当OA/TiO2。
(摩尔比) 为 012 时 ,TiO2 纳米粒子表面的活性基团还未反应完全 ;而当 OA/ TiO2(摩尔比) 超过 014 时 ,油酸已达到饱和量 ,所以反应体系中 OA/ TiO2(摩尔比) 最佳值为 014 左右.。
②XPS 研究表面状态
图 2 是表面修饰 TiO2 纳米粒子的 XPS 图. 由于从图 2(a) 中可以看出有大量的 CH2 基团存在于该纳米粒子中 ,所以可将长链烷基中的 C1s的结合能作为标准来校正谱图中其他元素的结合能峰值. 从图 2 (b) 可见 ,C1s的结合能有两个值分别为 28415 和 28815 eV ,前者代表了长链烷基中的 CH2 ,后者则与酯中羰基(COO) 上的 C 的结合能(28815 eV) 相吻合 ,并且二者的峰面积比约为 20∶1 ,与油酸中 CH2 和 COO 之比(17∶1) 基本相符. 此外从图2 ( c) 中可得到 Ti2p的值 ,2p3/ 2=45813 eV ,与 TiO2 中 Ti2p的标准值 (2p3/ 2 = 45818 eV) 十分接近. 从图 2 (d) 可见 ,O1s的结合能有两个值分别为 52915 eV 和53117 eV ,前者与 TiO2 中 O1s的标准值(52919 eV) 接近 ,而后者居于羰基中 O1s (53015~53115 eV) 以及羟基中 O1s (531~532 eV) 之间 ,所以该谱峰比较复杂 ,应该是上述两种 O1s混合峰. 综上可见 ,改性后的 TiO2 纳米粒子表面的确有油酸修饰层的存在.由 XPS 定量分析得到 TiO2 纳米粒子表面 Ti , O , C 三种元素的相对百分含量 (按摩尔数计) ,可以计算得到 TiO2 纳米粒子表面键合的油酸与表面 OH 的摩尔数之比. 从而得到油酸浓度与表面覆盖量的关系图 (图 3) . 由图可见 ,表面修饰后的 TiO2 纳米粒子表面[OA]/ [OH]与反应物中油酸浓度在一定范围内成正比 ,并且当 OA/ TiO2 值为 014 左右时 ,TiO2表面覆盖量基本不再变化 ,油酸浓度达到饱和. 此时纳米粒子表面的化学反应已经接近完成 ,强活性中心已基本与油酸反应完 ,而弱活性中心并不能与油酸反应 ,多余的油酸被溶剂洗去.。
③TEM 分析表面修饰纳米 TiO2 的形态。
图 4 为未修饰 TiO2 纳米粒子和油酸修饰 TiO2 纳米粒子分散于正己烷的 TEM 像. 图 4 (a) 和(c) 为放大 104 倍的 TEM图 ,图 4 (b) 和(d) 为放大 105 倍的 TEM 图. 由图 4 (c) 可见未修饰 TiO2 纳米粒子呈明显的聚集态 ,软团聚粒子的尺寸很大 ,一般为 103 数量级纳米. 而且图 4 (d) 中可见未修饰 TiO2纳米微粒颗粒很不清晰 ,基本上难以区分单个的纳米微粒.这是因为纳米粒子的表面活性很高 ,很容易团聚在一起成为带有若干弱连接界面尺寸较大的团聚体. 从图 4 ( a) 可见油酸修饰的 TiO2 纳米粒子分散较好 ,无明显聚集现象. 而且图4(b) 可见油酸修饰的 TiO2 纳米微粒颗粒较清晰 ,粒径基本一致为 20 nm ,与 P25 的颗粒大小一致. 这是因为经表面修饰的 TiO2 纳米粒子表面包裹了大的非极性基团 ,使得粒子之间距离增大 ,粒子间不能紧密接触[1]从而可以很好分散于非极性有机溶剂 ,并且有效降低了纳米颗粒的软团聚现象.。
④ 分散性研究
分散性试验结果表明 ,油酸修饰的 TiO2 纳米粒子在有机溶剂 ,如 CCl4、正己烷、增塑剂中有良好的分散性 ,而在水中分散性很差. 未经表面修饰的TiO2纳米粒子不能分散于非性有机溶剂 ,但在水中分散性很好. 证明了合成的表面修饰 TiO2 纳米粒子表面含有非极性的基团.由于纳米 TiO2 具有很高的表面活性 ,表面大量的悬挂键极易水解产生 OH ,故很难将其表面 OH 完全酯化 ,这样得到的是结构为 TiO2(OH) n - y(OOCC17H33) y 的产物 ,纳米粒子表面修饰层中的脂肪链有疏水作用 ,使得表面修饰的纳米粒子在非极性有机溶剂及增塑剂中有良好的分散性 ,并有效减少了纳米粒子的团聚现象. 而纳米粒子表面的 OH 使其也可以很好分散于极性的乙醇中.将反应物中不同油酸浓度修饰的纳米 TiO2 样品在不同溶剂中的分散性进行比较 ,结果表明 ,当油酸/ TiO2(摩尔比)超过 014 ,得到的表面修饰产物在有机溶剂中的分散性很好 ,而在水中的分散性很差. 油酸/ TiO2(摩尔比) 小于 014时 ,得到的表面修饰产物在有机溶剂和水中的分散性能都不太好. 从该结果也可证实 ,在 TiO2 表面修饰的反应体系中 ,油酸/ TiO2(摩尔比) 最佳值应为 014 左右.。
3 结论
以油酸为表面修饰剂 ,在正己烷溶剂中成功合成了油酸表面修饰的 TiO2 纳米粒子.。
2. 表面修饰层与 TiO2 纳米粒子表面发生了键合作用 ,产生了类似于酸和醇生成酯的化学反应.。
3. 获得了油酸表面修饰 TiO2 纳米粒子的最佳合成参数 ,反应温度 60 ℃,油酸/ TiO2。
(摩尔比) 014 左右.
References
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3 Herron , N. ; Wang , Y. ; Eckert , H. J . Am. Chem. Soc.1999 , 57 , 491.。
4 Zhang , Z.2J . ; Xue , Q.2J . ; Zhang , J . Wear 1997 , 209 , 8.。
5 Gao , Y.2J . ; Chen , G.2X. ; Zhang , Z.2J . ; Xue , Q.2J . Wear2002 , 252 , 454.。
6 Chen , S. ; Liu , W.2M. Chem. J . Chin. Univ. 2000 , 21 , 472(in Chinese) .。
(陈爽 , 刘维民 , 高等学校化学学报 , 2000 , 21 , 472. )。
转载自化学学报 ACTA CHIMICA SINICA(2003 年第 61 卷第 9 期 , 1484~1487)
原文地址:http://www.qianchusai.com/cc/%E7%94%B5%E5%AD%90%E6%98%BE%E5%BE%AE%E9%95%9C.html