碳排放量比去年下降40%
The carbon emission rate has been lowered by 40% as compared with last year.。
减少使用空调
Use less air conditioning。
http://www.ehow.com/how_2163904_use-less-heat-air-conditioning.html。
成功完成Western Blot检测,必须满足4个条件:
1,凝胶洗脱:转移期间蛋白质必须从凝胶中洗脱出来,如果蛋白质还截留在凝胶中,将无法在膜上进行分析。
2,吸附到膜上:在转移过程中蛋白质必须吸附到膜上,如果蛋白不吸附,将无法在膜上进行分析。
3,处理期间仍截留在膜上:在转移后的处理过程中蛋白质必须保持吸附在印迹膜上。
4,处理过程中可接近:被吸附的蛋白质必须能够与检测试剂接触,如果蛋白质被掩盖则无法检测。
成功进行WB检测,则设置合适正确的对照是必不可少的,只要正确设置了这些对照,即可快速和准确的找到WB的问题所在,并保证实验结果的准确性和特异性!
一般需要设置的对照如下:
阳性对照:明确表达检测蛋白的组织或细胞,用于检测抗体的工作效率。
阴性对照:明确不表达检测蛋白组织或细胞,用于检测抗体的特异性。
二抗对照:不加一抗,用于检测二抗的特异性。
内参对照:检测标本的质量和二抗系统。
空白对照:不加一抗和二抗;用于检测膜的性质和封闭的效果 。
WB检测基本过程
1、获取细胞或组织裂解物
1)根据检测蛋白的位置选择合适的裂解buffer:
蛋白位置
推荐buffer
全细胞
NP-40 or RIPA
胞浆(可溶性蛋白)
Tris-HCl
胞浆(骨架结合蛋白)
Tris-Triton
膜蛋白
NP-40 or RIPA
核蛋白
RIPA or 核蛋白提取试剂盒。
线粒体蛋白
RIPA or 线粒体分离试剂盒。
亦可购买商业化的蛋白提取试剂盒来保证标本制备的质量。
2)选择合适的蛋白酶抑制剂,避免蛋白降解,从而保证检测的准确性!
2、蛋白定量
常用的蛋白定量方法:Bradford assay, Lowry assay 或BCA assay。定量后,可根据情况将标本保存在-20°C /-80°C备用,进行免疫沉淀(IP)或者直接进行电泳分离蛋白。
3、电泳分离蛋白质
根据待测蛋白状态确定电泳条件:
待测蛋白状态
凝胶条件
上样buffer
电泳buffer
Reduced - Denatured。
还原,变性
含β-巯基乙醇或DTT,含SDS。
含SDS
Reduced - Native。
还原,不变性
含β-巯基乙醇或DTT,不含SDS。
不含SDS
Oxidized - Denatured。
不还原,变性
不含β-巯基乙醇或DTT,含SDS。
含SDS
Oxidized - Native。
不还原,不变性
不含β-巯基乙醇或DTT,不含SDS。
不含SDS
根据待测蛋白分子量大小确定凝胶浓度。
蛋白分子量(kDa)
凝胶浓度(%)
4-40
20
12-45
15
10-70
12.5
15-100
10
25-200
4、转膜
根据不同的检测目的和待测蛋白的特性,选择合适的膜类型。常用的转移膜类型有:PVDF膜、NC膜和尼龙膜,其中PVDF和NC膜的使用频率最高。各种膜的技术参数及比较如下:
PVDF膜
NC膜
尼龙膜
灵敏度和分辨率
高
高
高
背景
低
低
较高
蛋白结合能力
100-200ug/cm2(适用于SDS存在时与蛋白结合)
80-100ug/cm2
>400ug/cm2
机械强度
强
干的膜易脆
软而结实
溶剂抗性
强
差
差
使用前是否需要浸润
100%甲醛润湿
缓冲液润湿
缓冲液润湿
适用染色方法
胶体金、丽春红、酰胺黑、印度墨汁、考马斯亮兰。
胶体金、丽春红、酰胺黑、印度墨汁。
不能用阴离子染料
适用检测方法
显色法、化学发光、荧光、放射性、化学荧光、快速免疫检测。
显色法、化学发光、荧光、放射性。
显色、化学发光、放射性
适用范围
普通蛋白WB、糖蛋白检测、蛋白质测序、氨基酸分析、重复检测。
普通蛋白WB、氨基酸分析、重复检测。0.1um膜适用于7kDa以下蛋白。
低浓度小分子蛋白、酸性蛋白、糖蛋白、蛋白多糖、核酸检测常用。
价格
高
较低
低
reduce:英 [rɪˈdjuːs] 美 [rɪˈduːs]。
v.减少;缩小(尺寸、数量、价格等);(使)蒸发;减轻体重;节食;使还原。
第三人称单数: reduces 现在分词: reducing。
过去式: reduced 过去分词: reduced。
例句:
1.Better insulation of your home will help to reduce heating bills.。
增加房子的隔热性能会有助于减少供暖费用。
2.Their aim is to reduce people's dependency on the welfare state.。
他们旨在减少人们对福利制度的依赖。
3.We can reduce the problem to two main issues.。
我们可以将这个问题概括成两个要点。
4.There is some noise in the data which needs to be reduced.。
资料里有一些需要删除的不适用信息。
5.We'll need to reduce the weight by half.。
我们得把重量减轻一半。
6.The number of employees was reduced from 40 to 25.。
雇员人数从40人减少到了25人。
7.If these measures also reduce unemployment, that is all to the good.。
要是这些措施也能降低失业率,那就不失为好事。
8.Costs have been reduced by 20% over the past year.。
过去一年,各项费用已经减少了20%。
。
。
。
(1)一学生叫Tom,正尝试去从暑假工作中储存钱。在8月,他通过在餐厅洗碗得到100元,他储存了25%,他储存了多少?
25
(2)许多商店有一些打折活动,Tom注意到有一间商店有书包销售,书包本是100元,这天书包便宜40%,Tom需要付多少钱?
60
(3)买完后,还剩下百分之几的钱Tom用了?
100-25-60=15
15%
reduce to “降低到……,减少到……”,介词to后面接的是最终的结果,也就是最后的位置或程度。 例如:
The temperature is 36 degrees,but it will be reduced to 20 degrees in the night. 。
现在气温40度,但是夜间将会降低到20度。
reduce by “降低了……,减少了“,介词by后面跟降低或减少的具体幅度。例如:
He weighed 75 kilos last month, and now his weight has been reduced by 10 kilos.他上个月75公斤,现在减了10公斤。(现在是65公斤)