应用流式细胞仪协议的共轭二抗胞内染色。
A解决方案和试剂
1.1倍,磷酸盐缓冲液(PBS):溶解8克氯化钠,氯化钾0.2克,1.44 gNa2HPO4and0.24克KH2PO4in 800毫升蒸馏水(dH2O)。调整在室温下用HCl和1 liter.Store量pH值to7.4 。
2.Formaldehyde(甲醇免费)
3.Incubation缓冲区:溶于100毫升1XPBS.Store在4 ° C 0.5克牛血清白蛋白(BSA)
乙固定
离心,吸上清1.Collect细胞。
简要0.5-1毫升PBS.Add甲醛2.Resuspend细胞最后。
浓度为2-4%的甲醛。
10分钟,在37 ° C的3.Fix 。
在冰上4.Chill管1分钟。
荤打孔
加入冰冷的100%甲醇慢慢预先冷冻细胞,而轻轻涡旋,以90%的终浓度methanol.Alternatively,消除之前修复通透1.Permeabilize细胞,离心和悬浮颗粒细胞的90%甲醇。
2.Incubate 30分钟,在冰上。
3.Proceed与染色或储存在细胞在90%甲醇20℃。
d染色使用未加标签,小学共轭二抗。
注意:允许同型相匹配的单克隆抗体或物种的控制匹配,可使用血细胞计数器或其他方法克隆antibodies.Count细胞抗体。
1.Aliquot 0.5 - 1x106到每个检测管细胞(体积比)。
2.Add 2-3毫升每孵化缓冲区管冲洗的centrifugation.Repeat。
在100μl的孵化缓冲区每检测管3.Resuspend细胞。
在孵化缓冲4.Block 10分钟,在室温下。
5.Add在适当稀释法管的主要抗体(见适当稀释个别抗体数据表)。
6.Incubate为30-60分钟,在室温下。
作为孵化前缓冲7.Rinse通过离心。
在荧光共轭二抗*稀释后,8.Resuspend细胞。
孵化缓冲区根据制造商的建议。
9.Incubate 30分钟,在室温下。
作为孵化前缓冲10.Rinse通过离心。
11.Resuspend细胞PBS和0.5毫升的流式细胞仪分析。
*推荐由Invitrogen公司二抗。
阿- 11070 Alexa的福陆公司?488的F(ab')2片段的羊抗兔IgG(高+长)(1:1000稀释)
阿- 11017 Alexa的福陆公司?488的F(ab')2片段的山羊抗鼠IgG(高+长)(1:1000稀释)
不太一样的.
hatch: n. 舱口(建筑物屋顶或地板上的开口,或在船的甲板或飞机上);v. 孵化--此处指孵出来,重点是出来. hatch还有think out and produce (a plot, plan, etc)策划(阴谋),拟订(计画)的意思。
而incubate:v. keep (eggs) warm, usu by sitting on them, until they hatch-----指的是"孵化"这一过程,重点是孵化.另外incubate还有(使某事物)逐渐发展, 酝酿的意思.。
简单来说,母鸡坐在蛋上等着就是incubate,小鸡从里面出来就是hatch,在孵蛋这回事儿上差不多可以互通.还是要根据上下文.。
词根(root)是基本构词的基本词素,与词缀相对并携带主要词汇信息。
英语单词构成有其规律,很好的掌握了构词规律,才可以很好、很快的、准确的记忆单词。英语单词构词法的核心部分,在于词根,词的意义主要是由组成单词的词根体现出来的。
词根可以单独构成词,也可以彼此组合成词,通过前缀后缀来改变单词的词性和意义。(词根和词缀叫构词语素)也就是说,单词一般由三部分组成:词根、前缀和后缀。词根决定单词意思,前缀改变单词词义,后缀决定单词词性。
扩展资料:
一个英语单词可以分为三个部分:前缀(prefix),词根(stem)及后缀(suffix)。单词中位于词根前面的部分就是前缀。前缀,可以改变单词的意思。
常见的前缀有如下几类:
第一类:表示正负(或增减)的,如:un-in-im-il-ir-non-mis-mal-dis-anti-de-under-re-over-等;
第二类表示尺寸的,如:semi-equi-mini-micro-macro-mega-等;
第三类表示位置关系,如:inter-super-trans-ex-extra-sub-infra-peri-等;
第四类表示时间和次序,如:ante-pre-prime-post-retro-等;
第五类表示数字,如:semi-mono-bi-tri-quad-penta-hex-sept(em)-oct-dec-multi-等;
其它类别,如:pro-auto-co-con-等。
参考资料:百度百科 词根
lurk 潜伏, 埋伏, 潜在。
The murderers lurked behind the trees.。
谋杀者埋伏在树后。
【希望帮助到你,若有疑问,可以追问~~~。
祝你学习进步,更上一层楼!(*^__^*)】
将细胞培养瓶竖立放置,吸走培养基,如果培养基中的脱落细胞较多,说明细胞现在很容易脱落,只要加入1ml的PBS+EDTA(0.02%),来回轻微晃动培养瓶直到细胞完全脱落,加入10mlMEM,混匀,不能吹打,分装2瓶。
如果细胞没长满就脱落,则只需加入5mlMEM,不分装。如果培养瓶中的细胞贴壁较牢固,培养基上清没有细胞脱落碎片,且细胞长满达到80%以上,吸走培养基,加入5ml的PBS+EDTA(0.02%),迅速轻微晃动,竖立培养瓶,吸走,加入1ml0.05%胰酶,37度消化不超过3min。
扩展资料:
注意事项:
1、尽量用早期的细胞,传代太多状态不好,产毒也不好,贴壁困难。
2、塑料的瓶子,DMEM +10%的小牛血清即可,要求并不高,ATCC上有详细的培养方法。
3、主要是传代,胰酶消化点到即止,不能和其它成纤维细胞一样。
4、细胞代数越高生长越快,同时性状和原代差别也更大。一般2-3天传代一次比较合适。
5、传代时细胞密度在80%左右比较好,如果超过90%融合再传会影响细胞状态。
参考资料来源:百度百科-293细胞。